刺參微衛(wèi)星親子鑒定應(yīng)用及高溫脅迫下表觀遺傳調(diào)控探討.pdf

1、一、微衛(wèi)星標記在刺參人工繁育中親本識別的應(yīng)用
　　親子鑒定最早應(yīng)用于司法鑒定領(lǐng)域，隨著其技術(shù)發(fā)展成熟，現(xiàn)在已經(jīng)廣泛地應(yīng)用到動物學(xué)、植物學(xué)及生態(tài)學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域。在水產(chǎn)動物遺傳育種中，隨著現(xiàn)代生物科技的不斷發(fā)展，親子鑒定也廣泛的為良種選育、系譜追蹤提供技術(shù)支持，應(yīng)用親子鑒定技術(shù)鑒別個體身份，清晰系譜信息有著極為重要的現(xiàn)實意義。
　　本研究選取8個高多態(tài)性的微衛(wèi)星位點，對240頭刺參幼體和14頭疑似親本進行親緣關(guān)系的鑒定。通過檢測，

2、8個微衛(wèi)星位點共得到53個等位基因，平均等位基因數(shù)為6.63；觀察雜合度在0.730-0.902之間；各位點的多態(tài)信息含量為0.696-0.836。通過親緣關(guān)系分析軟件CERVUS3.0分析，微衛(wèi)星位點累積排除概率分別為0.9934，0.9997，0.99999?；谂懦▊€體基因型判定，有37個子代有1個候選親本，194個子代有2個及以上候選親本；基于似然法判定，置信度為80％時，有198個子代個體找到最似親本。綜合排除法和似然法的親

3、權(quán)鑒定，成功為229個子代個體找到它們的親本，鑒定成功率達95%以上，研究結(jié)果可為刺參良種選育中混養(yǎng)群體優(yōu)勢性狀溯源、系譜明晰提供便捷可靠的工具，從而提高選育效率，有效縮短人工繁育周期，加快良種選育進程，促進刺參養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。
　　二、高溫脅迫下刺參表觀遺傳調(diào)控相關(guān)基因的表達分析
　　生物體在受到逆境脅迫時，可以誘導(dǎo)體內(nèi)的各種表觀遺傳修飾發(fā)生變化，它們通過調(diào)控脅迫響應(yīng)基因的表達來達到改變生物體的生理狀態(tài)，最終達到適

4、應(yīng)環(huán)境的目的。表觀遺傳變異在生物體應(yīng)對逆境脅迫中發(fā)揮了重要的作用，人們希望通過對這些表型變異進行選擇以達到改良生物的目標?？傊?，對表觀遺傳的進一步深入研究將有助于進一步揭示其在生物抗逆中的作用，為利用表觀遺傳學(xué)進行育種奠定堅實的理論基礎(chǔ)。
　　以刺參看家基因β-actin為內(nèi)參進行校正，比較了3個表觀遺傳調(diào)控相關(guān)基因在刺參的呼吸樹、腸、體液、肌肉組織中的表達情況。以15℃條件下的刺參為對照組，其目的基因表達量為基準1，不同的基因在

5、不同溫度脅迫下的相對表達量如圖所示：在體液中，DNMT1基因在18℃時表達量上升不顯著，18℃到21℃時表達量上升極顯著，21℃到24℃時上升不明顯，30℃得到最大表達量為3.26，總體為上調(diào)表達；HDAC3基因和MLL5基因在24℃時的表達量顯著，之后隨著溫度升高其表達量稍有升高，分別在30℃得到最大表達量為2.90和3.19?？傮w來看，各基因隨著溫度的升高其表達量都增高，上調(diào)表達趨勢明顯，在30℃達到最高表達量。數(shù)據(jù)顯示，各基因在各

6、組織中的表達量也有差異，在體液中的表達量最高，其次是腸、呼吸樹，最低的是肌肉。在30℃的溫度脅迫條件下，檢測在0、3、6、9、12、15h6個時間點3個基因的表達量，以0h時各基因的表達量為基準1，結(jié)果顯示，三個基因的表達量都表現(xiàn)為上調(diào)表達，在0-9h，隨著脅迫時間的延長，表達量上升趨勢明顯；DNMT1、HDAC3在9h達到最高表達量后隨著溫度升高表達量有下降趨勢，但總體表達仍為上調(diào)表達。各基因在體液中的表達量比在其它組織中的表達量高。