結(jié)核分枝桿菌CE復(fù)合物對人單核-巨噬細(xì)胞的功能表型的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、【目的】研究結(jié)核分枝桿菌CE復(fù)合物對人單核-巨噬細(xì)胞功能表型的影響及其作用的細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路，從而發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌逃避巨噬細(xì)胞殺傷，造成潛伏以及慢性感染的可能機(jī)制，為結(jié)核病的防治提供新的思路。 【方法】用大腸桿菌克隆表達(dá)純化的CE復(fù)合物與單核細(xì)胞系THP-1細(xì)胞或者人血來源的單核細(xì)胞共同培養(yǎng)，分別設(shè)定不同濃度的CE復(fù)合物以及不同培養(yǎng)時(shí)間，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清以及細(xì)胞。采用ELISA法檢測CE復(fù)合物刺激人單核-巨噬細(xì)胞TNF-α、IL

2、-10、IL-12的產(chǎn)生的水平，采用流式細(xì)胞儀檢測CE復(fù)合物刺激細(xì)胞表型的變化：并且應(yīng)用各種細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路抑制劑來發(fā)現(xiàn)CE復(fù)合物作用的細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路。 【結(jié)果】結(jié)核分枝桿菌CE復(fù)合物能夠在共同培養(yǎng)早期(4～8h)誘導(dǎo)人單核.巨噬細(xì)胞活化，大量產(chǎn)生TNF-α:細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路MEK1/2和P38 MAPK的選擇性抑制劑SB203580,PD98059,U0126能抑制CE的這種作用；CE復(fù)合物在早期(<18h)促進(jìn)單核-巨噬細(xì)

3、胞表面抗原提呈功能分子HLA-DR,CD80,CD40的表達(dá)。但在同培養(yǎng)晚期(>48h)，CE復(fù)合物則抑制單核巨噬細(xì)胞TNF-α的產(chǎn)生，抑制抗原提呈功能分子HLA-DR,CD80,CD40的表達(dá)，促進(jìn)IL-10的產(chǎn)生，以及在IL-4的參與下刺激單核細(xì)胞表面大量表達(dá)樹突狀細(xì)胞特異性ICAM-3捕獲非整合素(DC-SIGN)。 【結(jié)論】CE復(fù)合物在感染早期可能通過激活細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路MEK1/2和P38MAPK刺激單核巨噬細(xì)胞活化，