Notch1基因?qū)θ四z質(zhì)瘤U251細胞增殖和周期的影響及其機制的初步研究.pdf

1、目的：
　　 1、檢測Notch1基因?qū)θ四z質(zhì)瘤U251增殖和細胞周期的影響。
　　 2、探討Notch1基因影響人膠質(zhì)瘤U251細胞增殖和周期的可能機制。
　　 方法：
　　 1、利用Notch1-shRNA和pNL-NICD/EGFP慢病毒感染人膠質(zhì)瘤U251細胞，RT-PCR和Western Blotting法篩選和鑒定Notch1表達下調(diào)或Notch1胞內(nèi)段(Notch1 intracellula

2、r domain，NICD)表達上調(diào)的U251細胞。
　　 2、MTT法和PI單染流式細胞術(shù)分析Notch1對細胞增殖和細胞周期的影響。
　　 3、采用RT-PCR和Western blotting法檢測NF-κB p65表達；EMSA法檢測NF-κB的活性。
　　 4、采用RT-PCR法檢測細胞周期相關(guān)基因，包括p53，p21，p27，p16，cyclinD1，cyclinE1，cyclinA2，cyclinB

3、1，cyclinB2，CDK2，CDK4，CDK6，Cdc25C的表達情況，對mRNA表達水平變化的基因，進一步采用Western blotting法檢測其蛋白表達水平。
　　 結(jié)果：
　　 1、Notch1-shRNA慢病毒表達載體能有效下調(diào)U251細胞Notch1的表達，而pNL-NICD/EGFP慢病毒表達載體能有效上調(diào)U251細胞NICD的表達。
　　 2、Notch1基因表達下調(diào)的細胞其細胞增殖能力受到

4、明顯抑制(P＜0.01)，并引起細胞G1期阻滯(P＜0.01)，S期細胞減少(P＜0.01)；在NICD表達上調(diào)的細胞其增殖能力明顯增強(P＜0.01)，且引起G1期細胞減少(P＜0.05)，S期細胞增加(P＜0.01)。
　　 3、Notch1基因表達下調(diào)的細胞其NF-κB p65 mRNA和蛋白表達水平顯著降低(P＜0.05)，NF-κB DNA結(jié)合活性顯著降低(P＜0.01)；在NICD表達上調(diào)的細胞其NF-κB p65m

5、RNA和蛋白表達水平顯著增加(P＜0.01)，NF-κB DNA結(jié)合活性顯著增加(P＜0.01)。
　　 4、Notch1基因表達下調(diào)的細胞其cycl inD1、cyclinA2、CDK2、Cdc25C的mRNA和蛋白表達水平顯著降低(P＜0.01)；而在NICD表達上調(diào)的細胞，這些基因的mRNA和蛋白表達水平顯著增加(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、Notch1基因與人膠質(zhì)瘤U251細胞的增殖能力和周