土貝母苷甲誘導(dǎo)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞凋亡及其潛在機(jī)制的研究.pdf

1、目的：土貝母是我國(guó)一種傳統(tǒng)的中草藥，具有廣泛的用途,土貝母苷甲（TBMS I）是從土貝母中分離純化出的一種天然化合物。本實(shí)驗(yàn)以神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞為模型，初步探究土貝母苷甲在體外的抗膠質(zhì)瘤作用及其潛在機(jī)制。
　　方法:我們運(yùn)用MTT法檢測(cè)不同濃度的TBMS I對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響。通過倒置熒光顯微鏡來觀察細(xì)胞核形態(tài)學(xué)的變化。運(yùn)用流式細(xì)胞儀分析TBMS I對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的影響以及檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的水平。實(shí)時(shí)熒

2、光定量PCR技術(shù)檢測(cè)miR-21以及PDCD4基因水平的變化。Western blot法分析相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：TBMS I以劑量和時(shí)間依賴方式抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的增殖。TBMS I處理24h后，通過Hoechst33258染色法，我們觀察到U251細(xì)胞出現(xiàn)了細(xì)胞核濃染、核碎裂、凋亡小體形成等凋亡形態(tài)學(xué)改變。流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，TBMS I以劑量依賴方式誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)瘤 U251細(xì)胞凋亡。Western bl

3、ot結(jié)果提示，TBMS I通過上調(diào)FADD、caspase-8、caspase-3、Bax的表達(dá)以及下調(diào)Bcl-2的表達(dá)誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡。此外，我們還發(fā)現(xiàn)，TBMS I能夠?qū)е录?xì)胞中活性氧(ROS)生成增加，從而促進(jìn)細(xì)胞色素 C（Cytochrome C）的釋放以及 Caspase-3的活化，進(jìn)而誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)瘤 U251細(xì)胞凋亡。PCR結(jié)果顯示, TBMS I作用于U251細(xì)胞后，miR-21的水平逐漸降低，而PDCD4基因的水平顯