擬南芥抗致病疫霉突變體的篩選及T-DNA側翼序列分析.pdf

1、擬南芥(Arabidopsts thaliana)屬十字花科蕓薹屬植物，在顯花植物中，基因組最小(大小為125Mb)，體細胞中僅5對染色體，并且基因組序列己測序完成。 本研究將致病疫霉不同菌株接種到擬南芥Col-0生態(tài)型激活標簽突變體上后，發(fā)現(xiàn)其抗感反應不同，并篩選出了感致病疫霉的突變體類型。以篩選出的擬南芥感病突變體基因組DNA為模板，利用熱不對稱交錯PCR方法(Themal asymmetncinterlaced PCR，T

2、AIL-PCR)，進行了抗性相關基因的研究。通過TAIL-PCR技術，獲得了擬南芥T-DNA插入側翼序列，利用NCBI提供的擬南芥全基因組序列進行了序列同源性比對，主要結果如下： 測定擬南芥258個激活標簽突變體接種5個致病疫霉菌株后發(fā)現(xiàn)，AtTM31、AtTM 34、AtTM40、AtTM113、AtTM246對致病疫霉的菌株17-B-1表現(xiàn)為重度感病，AtTM114對菌株17-B-1表現(xiàn)為中度感病，AtTM32、AtTM14

3、4、AtTM243、AtTM244對菌株17-B-1表現(xiàn)為輕度感??；AtTM32、AtTM34、AtTM40、AtTM113對菌株W040604表現(xiàn)為重度感病，AtTM31、AtTM244對菌株W040604表現(xiàn)為中度感病，AtTM114、AtTM 144、AtTM243、AtTM246對菌株W040604表現(xiàn)為輕度感?。篈tTM31對菌株W041002表現(xiàn)為重度感病，AtTM32、AtTM34、AtTM40、AtTM113、AtTM2

4、43、AtTM246對菌株W041002表現(xiàn)為中度感病，AtTM114、AtTM144、AtTM244對菌株W041002表現(xiàn)為輕度感??；AtTM32、AtTM40對菌株W041904表現(xiàn)為重度感病，AtTM34、AtTM144、AtTM243、AtTM246對菌株W041904表現(xiàn)為中度感病，AtTM31、AtTM 113、AtTM114、AtTM243對菌株W041904表現(xiàn)為輕度感??；AtTM31、AtTM32、AtTM40、At

5、TM246對菌株W041406表現(xiàn)為重度感病，AtTM34、AtTM114、AtTM 243、AtTM244對菌株W041406表現(xiàn)為中度感病，AtTM113、AtTM144對菌株W041406表現(xiàn)為輕度感病。 TAIL-PCR可以有效地擴增T-DNA插入側翼擬南芥基因組序列，簡并引物AD1、AD2、AD4和特異引物(Lex2、Lex4和Lex5)、(Lex3、Lex4和Lex5)組成的引物組合是最佳引物組合。對10個TAIL-

6、PCR特異產物測序分析，發(fā)現(xiàn)2個T-DNA插入在基因上，2個則插入在基因間隔區(qū)中，5個是載體序列。 T-DNA在AtTM34突變體基因組上插入第3條染色體133bp左右，處在第1個外顯子上，該基因屬于氨基酸透性酶家族蛋白，與SP/Q9WTR6胱氨酸/谷氨酸轉座子有低的相似性(Amino acid transport system XC-){Mus musculus}；包笛Pfam profile PF00324： Amino a