秈稻T-DNA插入突變體的遺傳變異分析.pdf

1、隨著擬南芥、水稻等模式植物基因組全序列測(cè)定的相繼完成，大量新基因和功能未知基因的功能有待鑒定。突變體的產(chǎn)生與鑒定是揭示基因功能的一種最直接最有效手段，因此，構(gòu)建模式植物突變體庫(kù)、特別是T-DNA插入突變體庫(kù)已成為分析基因功能最常用的研究策略。 以優(yōu)良的雜交水稻恢復(fù)系“明恢”為受體材料，將無(wú)啟動(dòng)子經(jīng)修飾的GFP基因(SmGFP5)接在F-DNA的右邊界而構(gòu)建成的啟動(dòng)子捕獲載體pCASGFP-TRAP，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化“明恢86

2、”。目前，已經(jīng)獲得9200個(gè)獨(dú)立轉(zhuǎn)化克隆植株。PCR分析表明約有93.4％轉(zhuǎn)化植株中含有目的基因的插入。對(duì)其中1329個(gè)轉(zhuǎn)基因克隆T<,1>代植株的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，有279個(gè)克隆植株后代出現(xiàn)形態(tài)表型變異，形態(tài)表型變異頻率約為21.0％，主要表現(xiàn)為葉部、株高、分蘗、穗、花器官、粒形、育性、生育期和致死等9種類型突變。另外，還約有12.9％的轉(zhuǎn)基因后代在苗期出現(xiàn)失綠(黃化或白化)分離，其中約有71％的克隆其失綠苗在三葉期前大部分死亡；約有29％的