一種新的乙肝表面抗原結(jié)合蛋白的篩選、表達(dá)及其與HBV和肝cDNA噬菌體展示庫的親和性研究.pdf

1、在過去幾十年里對乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的分子生物學(xué)已經(jīng)有了相當(dāng)程度的了解,但對于HBV如何結(jié)合并最終進(jìn)入肝細(xì)胞仍不很清楚.現(xiàn)在普遍認(rèn)為HBV外膜蛋白是識(shí)別人肝細(xì)胞質(zhì)膜可能受體的重要分子,它決定了HBV對宿主細(xì)胞的靶向和最初的侵染過程.我們以乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)為探針,通過印跡免疫分析技術(shù)從人肝cDNA噬菌體表達(dá)庫中篩選出一株編碼乙肝表面抗原

2、結(jié)合蛋白的cDNA克隆.基因測序結(jié)果表明,該cDNA具有獨(dú)立的開放閱讀框架,編碼一個(gè)由344個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的可溶性蛋白分子,屬于免疫球蛋白超家族成員,暫命名為乙肝病毒表面抗原結(jié)合蛋白(HBV surface antigen binding protein,HBV-SBP).將該基因克隆到原核表達(dá)載體pTriplEx后,在E.coli XL1-Blue菌株中獲得44ku的重組HBV-SBP蛋白.重組HBV-SBP蛋白經(jīng)Western b

3、lotting和ELISA實(shí)驗(yàn)證明具有與乙肝表面抗原特異性結(jié)合的能力;進(jìn)一步經(jīng)流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)顯示,在純化的HBV-SBP存在的情況下,天然的HBsAg與肝細(xì)胞株HepG2的親和力顯著增高,而對其他細(xì)胞株如K562則不明顯.上述結(jié)果顯示,HBV-SBP可能是介導(dǎo)乙肝病毒對肝細(xì)胞親和侵染的可溶性輔助受體.我們還構(gòu)建了表達(dá)載體pBV-HBV-SBP,在HBV-SBP基因N端引入6×histag和腸激酶酶切位點(diǎn)DDDDK,并克隆到pBV220表