口腔黏膜異種異體移植免疫反應(yīng)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)及他克莫司干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、單核/巨噬細(xì)胞系統(tǒng)（Mononuclear phagocyte system，MPS）在非特異性免疫中，主要通過(guò)吞噬作用殺滅和清除病原體及異物并介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。巨噬細(xì)胞來(lái)自于骨髓的造血干細(xì)胞，經(jīng)血流到達(dá)各組織和臟器，發(fā)育成熟為Mφ，是體內(nèi)功能最活躍的細(xì)胞之一，在炎癥反應(yīng)、抗原提呈和免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮重要作用，其活躍的功能是由于表面存在多種抗原及多種受體。急性移植排斥反應(yīng)主要是以移植物內(nèi)單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的細(xì)胞免疫應(yīng)答，大量研究表明外周血

2、單核細(xì)胞及組織中巨噬細(xì)胞通過(guò)加工遞呈抗原、分泌多種炎性介質(zhì)和免疫調(diào)節(jié)因子而與異種移植免疫排斥反應(yīng)密切相關(guān)，但口腔黏膜中巨噬細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞能否直接識(shí)別和排斥異種移植物及其在急性排斥反應(yīng)中的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程目前尚缺乏相關(guān)報(bào)道。因此本研究利用本課題組建立的大鼠口腔黏膜異種異體移植模型，研究大鼠頰黏膜巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)與外周血單核細(xì)胞在口腔黏膜異種異體移植免疫反應(yīng)中的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程及規(guī)律，有助于闡明口腔黏膜異種異體移植免疫病理反應(yīng)過(guò)程。 目的 ：

3、 研究大鼠口腔黏膜異種異體移植模型急性排斥反應(yīng)過(guò)程中頰黏膜CD68+巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)及外周血CD68+單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程和規(guī)律及其意義。 方法： 1、模型的建立：69只SPF級(jí)雌性wistar大鼠隨機(jī)分成移植組15只、移植+FK506組12只、創(chuàng)傷組12只、創(chuàng)傷+FK506組12只、正常組9只、正常+FK506組9只，以灌胃給藥方式給予各用藥組大鼠他克莫司（FK506），手術(shù)前三天2mg/kg/day，術(shù)后

4、0．5mg/kg/day。按照本課題組前期建立的大鼠口腔黏膜異種異體移植模型手術(shù)方法給予各組相應(yīng)處理，移植組和移植+FK506組：BALB/c小鼠舌體移植到雌性wistar大鼠口腔左側(cè)頰黏膜內(nèi)；創(chuàng)傷組和創(chuàng)傷+FK506組：大鼠口腔左側(cè)頰黏膜僅行創(chuàng)傷手術(shù)；正常組和正常+ FK506組：大鼠口腔左側(cè)頰黏膜不予任何處理。 2、于手術(shù)后第7天、第14天和第28天分別處死移植組5只、移植+FK506組4只、創(chuàng)傷組4只、創(chuàng)傷+ FK506組

5、4只、正常組3只和正常+FK506組3只大鼠，取其頰黏膜組織及外周血，免疫組織化學(xué)法（S—P法）檢測(cè)頰黏膜組織CD68+巨噬細(xì)胞的組織分布及動(dòng)態(tài)變化情況，采用流式細(xì)胞儀動(dòng)態(tài)觀察及定量分析外周血CD68+單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的變化情況。 結(jié)果： 1、免疫組化染色檢測(cè)結(jié)果顯示，術(shù)后第7天移植組、移植+FK506組、創(chuàng)傷組和創(chuàng)傷+FK506組大鼠頰黏膜CD68+巨噬細(xì)胞記數(shù)均達(dá)到3個(gè)時(shí)點(diǎn)中各自峰值，其中移植組為各組中最高值（580．

6、00個(gè)/HPF），其次為移植+FK506組（325．80個(gè)/HPF），再次為創(chuàng)傷組（233．75個(gè)/HPF），每?jī)山M之間比較結(jié)果顯示移植組與創(chuàng)傷組、移植組與正常組、移植+ FK506組與正常+FK506組在術(shù)后第7天頰黏膜CD68+巨噬細(xì)胞記數(shù)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。術(shù)后第14天大鼠頰黏膜CD68+巨噬細(xì)胞記數(shù)移植+FK506組為最高值（246．45個(gè)/HPF），其次為移植組（220．00個(gè)/HPF），再次為創(chuàng)傷+FK506組

7、（141．10個(gè)/HPF），每?jī)山M之間比較結(jié)果顯示移植組與創(chuàng)傷組、移植組與正常組、移植+FK506組與正常+FK506組在術(shù)后第14天頰黏膜CD68+巨噬細(xì)胞記數(shù)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。術(shù)后第28天大鼠頰黏膜CD68+巨噬細(xì)胞記數(shù)移植組為最高值（173．00個(gè)/HPF），其次是創(chuàng)傷組（106．60個(gè)/HPF），再次為創(chuàng)傷+FK506組（92．00個(gè)/HPF），每?jī)山M之間比較結(jié)果顯示移植組與正常組、創(chuàng)傷組與正常組在術(shù)后第28天頰

8、黏膜CD68+巨噬細(xì)胞記數(shù)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。除創(chuàng)傷組的最低值出現(xiàn)在術(shù)后第14天之外，移植組、移植+ FK506組和創(chuàng)傷+FK506組大鼠頰黏膜CD68+巨噬細(xì)胞記數(shù)均隨時(shí)間推移呈遞減趨勢(shì)。相同時(shí)間點(diǎn)不同處理組大鼠在術(shù)后第7天、第14天和第28天移植區(qū)巨噬細(xì)胞記數(shù)差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。相同處理不同時(shí)間點(diǎn)各組內(nèi)移植組、創(chuàng)傷組大鼠在3個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)移植區(qū)巨噬細(xì)胞記數(shù)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 2、流

9、式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，術(shù)后第7天正常組外周血CD68+單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)為最高值（47．54％），其次是移植+FK506組（42．63％），再次為正常+FK506組（41．66％）。術(shù)后第14天正常組為最高值（38．92％），其次是創(chuàng)傷+ FK506組（26．96％），再次為創(chuàng)傷組（26．48％）。術(shù)后第28天移植+FK506組為最高值（67．33％），其次是創(chuàng)傷組（64．2％），再次為正常+ FK506組（56．27％），每?jī)山M之間比較顯

10、示移植與移植+ FK506組、移植組與創(chuàng)傷組、移植+FK506組與創(chuàng)傷+FK506組、移植+FK506組與正常+FK506組在術(shù)后第28天其外周血CD68+單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。除外正常組和正常+FK506組，其余各組外周血CD68+單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)最高值均出現(xiàn)在術(shù)后第28天，最低值均出現(xiàn)在術(shù)后第14天。相同時(shí)間點(diǎn)不同處理組大鼠外周血CD68+單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)在術(shù)后第7天和第14天其外周血CD68+單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)差

11、別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05），而在第28天差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。相同處理不同時(shí)間點(diǎn)各組內(nèi)移植組、創(chuàng)傷組大鼠在3個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)其外周血CD68+單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 3、術(shù)后第7天移植組大鼠外周血CD68+單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)與其頰黏膜局部浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞記數(shù)成負(fù)相關(guān)關(guān)系（P<0．05），其余各時(shí)間點(diǎn)之間各處理組大鼠外周血CD68+單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)與頰黏膜局部浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞記數(shù)均無(wú)相關(guān)關(guān)系（P>0．0