前列腺癌激素非依賴性轉(zhuǎn)變和細(xì)胞凋亡過程中PIASy與hZimp10啟動(dòng)子甲基化修飾變化的對比研究.pdf

1、DNA甲基化(DNA mcthylation)是真核生物基因組最常見的一種DNA共價(jià)修飾形式,是表觀遺傳學(xué)的一個(gè)重要方面。這一修飾現(xiàn)象廣泛存在于多種生物體中,且與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)。腫瘤中普遍存在DNA甲基化狀態(tài)的改變,表現(xiàn)為抑癌基因的高甲基化與癌基因的去甲基化。作為全世界范圍內(nèi)的男性惡性腫瘤——前列腺癌的進(jìn)展過程中同樣伴隨著某些抑癌基因的高甲基化,如STP1、ER等。轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的啟動(dòng)子甲基化的深入研究對于揭示惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)制具有重

2、要意義。
　　 PIASy和hZimp10是兩種新型的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,并在包括前列腺組織和睪丸組織中特異性表達(dá),對一些抑癌基因如P53、Smad的轉(zhuǎn)錄活性具有重要的調(diào)節(jié)作用。但是,PIASy和hZimp10對前列腺癌細(xì)胞的影響及其作用機(jī)制的研究還未見相關(guān)報(bào)道。本文從PIASy和hZimp10的啟動(dòng)子甲基化的角度出發(fā),對其在前列腺癌激素非依賴性轉(zhuǎn)變和細(xì)胞凋亡過程的作用進(jìn)行了初步的揭示和探討。
　　 首先,我們檢測了不同進(jìn)展度

3、的前列腺癌細(xì)胞內(nèi)PIASy和hZimp10蛋白的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)在前列腺癌細(xì)胞由激素依賴型向激素非依賴型的惡性轉(zhuǎn)變過程中,PIASy和hZimp10蛋白的表達(dá)水平下降,.在激素非依賴型PC3和DU145細(xì)胞中的表達(dá)顯著減少,提示了PIASy和hZimp10與腫瘤進(jìn)展相關(guān)。然后,通過序列分析顯示,PIASy與hZimp10啟動(dòng)子上CpG含量均異常豐富,推測PIASy與hZimp10的啟動(dòng)子序列上很可能存在甲基化修飾。我們通過5-氮孢苷誘導(dǎo)實(shí)

4、驗(yàn)檢測了兩者啟動(dòng)子的甲基化修飾情況。發(fā)現(xiàn)5-氮孢苷誘導(dǎo)顯著提高DU145細(xì)胞中PIASy的蛋白表達(dá)水平,而hZimp10蛋白表達(dá)水平?jīng)]有改變。進(jìn)一步,通過MSP實(shí)驗(yàn)我們檢測了三種前列腺癌細(xì)胞內(nèi)PIASy與hZimp10啟動(dòng)子甲基化修飾水平。激素依賴型前列腺癌細(xì)胞LNCaP的PIASy啟動(dòng)子甲基化修飾程度很低,而激素非依賴型前列腺癌細(xì)胞PC3和DU145中,PIASy啟動(dòng)子出現(xiàn)了顯著的甲基化修飾,證明了激素非依賴型的惡性轉(zhuǎn)變過程中PIAS

5、y表達(dá)水平的下降確實(shí)由于其啟動(dòng)子的甲基化修飾所致。與此不同的是,在不同的前列腺癌細(xì)胞中均未檢測到hZimp10啟動(dòng)子的甲基化修飾。說明盡管在前列腺癌細(xì)胞激素非依賴型.轉(zhuǎn)變過程中,hZimp10與PIASy表達(dá)水平都下降,但是其分子調(diào)節(jié)機(jī)制不同。
　　 鋅可以促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞凋亡,我們進(jìn)一步分析了PlASy啟動(dòng)子在細(xì)胞凋亡過程可能的甲基化修飾變化。發(fā)現(xiàn)在Zn2+誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞凋亡過程中,PIASy和hZimp10的蛋白表達(dá)明顯上