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1、目的:了解CP-31398對(duì)雄激素非依賴(lài)性前列腺癌細(xì)胞的體外抑制效應(yīng)并初步探討可能的作用機(jī)制。
方法:采用不同濃度的(1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL和10μg/mL)的CP-31398作用于雄激素非依賴(lài)性前列腺癌DU-145細(xì)胞,采用MTT法檢測(cè)CP-31398對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)活性的影響。采用RT-PCR法從mRNA水平檢測(cè)DU-145細(xì)胞中p21表達(dá);采用Western-Blot法在蛋白質(zhì)
2、水平檢測(cè)p53的表達(dá)。采用AnnexinV-PI染色使用流式細(xì)胞儀分析CP-31398對(duì)DU-145細(xì)胞凋亡的影響。采用PI染色法,使用流式細(xì)胞儀分析CP-31398對(duì)DU-145細(xì)胞細(xì)胞周期的影響。
結(jié)果:MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示細(xì)胞活性隨CP-31398濃度的逐漸增加而降低。2μg/mL的CP-31398可以誘導(dǎo)DU-145細(xì)胞產(chǎn)生凋亡,凋亡率從(1.10±0.53)%明顯提高至(20.63±2.94)%(P<0.05)。CP-
3、31398作用DU-145細(xì)胞24h后處于G0/G1期的細(xì)胞由(41.64±1.87)%增至(54.72±1.45)%(p<0.05),而處于S期的細(xì)胞則由(44.95±2.23)%減少至(34.75±1.46)%(p<0.05),處于G2/M期的細(xì)胞無(wú)明顯變化。RT-PCR可檢測(cè)到p21mRNA表達(dá)增加,Western-Blot可檢測(cè)到實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均表達(dá)p53蛋白。
結(jié)論:CP-31398能恢復(fù)變異型p53野生型功能,在體
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