新型脂質體結合超聲空化技術的腦膠質瘤靶向遞送研究.pdf

1、研究目的：作為抗腫瘤藥物載體，脂質體具有改變藥物在組織中的分布、提高穩(wěn)定性和降低藥物毒性等特點。本研究制備了一種新型脂質體，并對其進行了質量評價，旨在為臨床提供一種新的高效低毒制劑。雖然血腦屏障的存在使腦組織少受甚至不受循環(huán)血液中有害物質（如毒素、病毒等）的損害，對大腦形成有效保護的，但同時也阻礙了許多對病灶區(qū)有治療作用的藥物如抗癌藥、抗生素和肽類等的進入。如何能使藥物有效透過血腦屏障并到達靶區(qū)成為了藥物發(fā)揮治療作用的關鍵環(huán)節(jié)。近年研究

2、發(fā)現，超聲微泡空化技術能可逆、非侵襲性和局部地開放血腦屏障，為抗腫瘤藥物通過血腦屏障提供了新希望。本論文在課題組前期研究基礎上，利用創(chuàng)新制備的明膠-泊洛沙姆W/W型納米脂質體結合超聲空化技術，探索攻克對于腦膠質瘤的治療的瓶頸。
　　研究方法：
　　1、利用W/W型膠體結合二次凍干的制劑技術制備載藥脂質體，通過外觀溶液觀察以及粒徑、Zata電位和包封率的測定，制備出符合注射要求的載藥脂質體注射用粉針劑。
　　2、根據已有

3、自主知識產權的微泡制備方法，以產權要求的相同的處方與工藝條件制備脂質微泡。以脂質微泡的濃度、形態(tài)、粒徑及粒徑分布等作為考察指標，制備出符合超聲空化條件的脂質微泡。
　　3、采用腦立體定位法將10μl含1×106的C6膠質瘤細胞接種到SD大鼠的右側尾狀核，建立C6/SD大鼠腦膠質瘤模型。觀察大鼠接種后的生存狀態(tài)，記錄體重變化和生存時間。于接種后第9、16、23和30天分別行MRI增強掃描評價此法的成模率，觀察接種后瘤體生長變化情況和

4、腫瘤特性等。為后續(xù)研究提供穩(wěn)定的模型來源。
　　4、在超聲頻率、聲強、微泡濃度和粒徑大小等參數一定下，通過EB示蹤法考察16天荷瘤鼠分別超聲輻照10S，30S和60S后靶點EB染色情況，結合HE染色觀察有無組織出血壞死等現象確定超聲輻照參數。并通過EB示蹤法和MRI實時顯影檢測技術考察確定的超聲參數開放不同時期血瘤屏障的情況。
　　5、通過免疫組化法和WB法測定瘤體邊緣緊密連接蛋白claudin-5和蛋白β1-integri

5、n于超聲微泡作用后0h，0.5h，1h，1.5h，3h，6h和12h的表達變化，考察蛋白β1-integrin是否可能參與血腦屏障開放的調節(jié)。
　　6、以C6/SD大鼠為腦膠質瘤模型，以鹽酸阿霉素脂質體(Lip-DOX)為治療藥物，通過單純尾靜脈注射藥物或單純微泡+超聲輻照大鼠或兩者結合進行抗腫瘤治療。通過考察腫瘤體積抑制率、大鼠體重變化以及HE染色變化等指標評價抗腫瘤效果;通過鹽酸阿霉素脂質體的大鼠體內分布情況，考察脂質體的靶向

6、性。
　　研究結果：
　　1、本實驗制備的載藥脂質體平均粒徑為183nm，粒徑對稱分布，分散均勻。分析可能是制備后經過0.22um微孔濾膜過濾，加強了對脂質體的整粒作用。本實驗制備的阿霉素脂質體帶負電，其Zata電位為-16.6mV。
　　2、本實驗制備的脂質微泡凍干粉呈白色疏松粉末狀，復溶性好，光鏡下，空白脂質囊泡形狀圓整、粒徑較均勻，無聚集，平均粒徑為3.05μm。
　　3、建立的C6/SD大鼠腦膠質瘤模型簡

7、單易行、穩(wěn)定可靠，成模率近100％。為后續(xù)研究腦膠質瘤靶向治療方法提供了操作平臺。
　　4、本實驗在超聲頻率為1MHz、聲強為4W/cm2、輻照時間30S的參數下超聲聯合脂質微泡可以可逆開放血腦屏障。并且在該超聲參數條件下，不同時期的腦瘤屏障開放程度基本一致。
　　5、一定程度上證明了蛋白β1-integrin表達的下調，可能會引起血腦屏障的通透性增加。
　　6、體內實驗證明，新型脂質體聯合超聲空化技術給藥系統可以非常

8、有效地將鹽酸阿霉素遞送入腦，并對腦膠質瘤有顯著抑制作用。
　　結論：新型脂質體聯合超聲空化技術給藥系統能夠增加藥物的腦內和腫瘤轉運，具有一定的腦內和腫瘤遞藥特性。這種新型納米載體聯合超聲空化技術的遞藥方法有望成為一種新的腫瘤化療方法。本論文設計了一系列實驗，優(yōu)化了脂質體的制備技術和各項超聲參數，通過體內實驗驗證了這種給藥系統在腫瘤治療方面發(fā)揮的作用，提供了一種便捷的超聲介導抗腦腫瘤的治療方法。本文根據體內實驗數據結果，得到了一套安