IFA檢測石蠟和冰凍切片中鴨病毒性腫頭出血癥病毒方法建立及在檢測病毒鴨體內(nèi)侵染規(guī)律的應(yīng)用.pdf

1、本文開展了間接免疫熒光(Inadirect Immunofluorescence Assay，IFA)檢測石蠟切片與冰凍切片中鴨病毒性腫頭出血癥病毒(Duck Swollenhead。HaemorrhagicDisease Virus，DSHDV)方法建立，應(yīng)用IFA檢測DSHDV在實驗感染鴨體內(nèi)侵染規(guī)律等系列研究，獲如下結(jié)果： 1. IFA檢測石蠟切片與冰凍切片中鴨病毒性腫頭出血癥病毒方法建立及其比較 用差速離心純化：

2、DSHDV，將純化：DSHDV免疫家兔制備兔抗DSHDV高免血清，并以High Q陰離子柱層析純化出兔抗DSHDV IgG，建立間接免疫熒光(IFA)檢測石蠟切片與冰凍切片中DSHDV的方法；利用建立的IFA對28日齡鴨人工感染DSHDV死亡鴨不同組織器官以進(jìn)行檢測。IFA檢測DSHDV感染死亡鴨石蠟切片肝臟為陽性，檢測鴨瘟病毒、禽流感病毒(H5N1)、鴨病毒性肝炎病毒、鴨疫里默氏桿菌感染死亡鴨肝臟呈陰性；IFA檢測28日齡人工感染DS

3、HDV死亡鴨的不同組織器官石蠟切片，心、肝、脾、胰、肺、腎、法氏囊、食管、氣管、胸肌、胸腺、十二指腸、空腸、回腸、盲腸和直腸為陽性或強(qiáng)陽性；該法具有直觀、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用于：DSHDV在感染鴨組織細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位具有良好效果，可用于DSHDV感染的實驗室診斷、病原在鴨組織細(xì)胞中分布研究。IFA檢測28日齡人工感染DSHDV死亡鴨的不同組織器官冰凍切片，心、肝、脾、胰、肺、腎、法氏囊、食管、氣管、胸肌、胸腺、哈德氏腺、十二指腸、空腸

4、、回腸、盲腸和直腸為陽性或強(qiáng)陽性；該法敏感性高于石蠟切片且能快速出結(jié)果，可用于臨床快速診斷研究。 2. DSHDV在實驗感染鴨體內(nèi)侵染規(guī)律的研究 2．1 DSHDV實驗感染鴨臨床病理學(xué)發(fā)展規(guī)律 采用肌注、口服和滴鼻三種途徑感染28日齡北京鴨。感染鴨發(fā)病癥狀：病鴨初期精神沉郁，不愿走動，隨著病程的加劇，臥地不起，食欲減退，被毛凌亂，個別鴨流血淚，鼻腔流血性分泌物(90％)。并開始出現(xiàn)特征性癥狀：頭部腫脹(100％)

5、，眼結(jié)膜充血、出血呈紅色，排灰白色或草綠色稀糞甚至血便。眼觀病理變化：心冠脂肪有少量出血斑。頭部頸部下黃色膠凍樣水腫(80％)。胸腺出血嚴(yán)重，表面和切面有大小不等壞死點(diǎn)(70％)。肝臟呈橙黃色或土黃色，表面有大小不等的出血斑(85％)。心包有淡黃色積液(50％)。腎臟彌漫性出血。氣管環(huán)狀出血，滴鼻組多見(70％)。法氏囊嚴(yán)重出血。食道彌漫性出血形成條狀出血帶，口服組多見。泄殖腔黏膜初期有出血，后期壞死(50％)。脾腫大且呈深黑色，其上有

6、白色壞死灶(50％)。 2．2 DSHDV在實驗感染鴨體內(nèi)侵染規(guī)律 2．2．1肌注組侵染規(guī)律經(jīng)肌注感染90min后最早能從腎臟中檢出病毒抗原；感染后6d僅不能從皮膚、腦、氣管、哈德氏腺和腺胃中檢測出抗原，該時間段也是病毒達(dá)到分布的高峰時期；從不同的時間的檢測情況可以看出，經(jīng)肌注感染病毒在鴨體內(nèi)分布最為廣泛的時間段為感染后12h～6d。 2．2．2口服組侵染規(guī)律 DS：HDV經(jīng)口服途徑感染初期腎臟、腸道、胸

7、腺、法氏囊的陽性信號較強(qiáng)，而肺臟、心臟陽性信號弱。感染中期大多數(shù)組織都檢測到了陽性信號，其中腎臟、腸道陽性信號有所增強(qiáng)，脾臟、肌肉、氣管開始檢測到陽性；哈德氏腺、腦、皮膚、腺胃在感染的整個過程都無陽性信號出現(xiàn)。 2．2．3滴鼻組侵染規(guī)律 DSHDV經(jīng)滴鼻感染后4h最早能從腎臟腎小管上皮細(xì)胞漿中檢出病毒抗原；感染后12h，能夠從肝臟、腎臟、十二指腸和回腸中檢出病毒抗原；感染后3d，僅不能從腦、腺胃、皮膚、哈德氏腺中檢測出抗

8、原。所以經(jīng)過滴鼻途徑感染DSHDV后24h～6d時間段是病毒達(dá)到分布的高峰時期；從不同的時間的檢測情況可以看出，經(jīng)滴鼻感染病毒在鴨體內(nèi)分布最為廣泛的時間段為感染后3d～6d。 綜上所述，鴨胚是：DSHDV增殖的良好宿主平臺，運(yùn)用建立的IFA對人工感染DSHDV后石蠟切片與冰凍切片中病毒在鴨體內(nèi)的分布規(guī)律進(jìn)行研究表明：IFA檢測28日齡鴨人工感染DSHDV死亡鴨的心、肝、脾、胰、肺、腎、法氏囊、食管、氣管、胸肌、胸腺、哈德氏腺、十