IFA檢測(cè)石蠟和冰凍切片中鴨病毒性腫頭出血癥病毒方法建立及在檢測(cè)病毒鴨體內(nèi)侵染規(guī)律的應(yīng)用.pdf

1、本文開(kāi)展了間接免疫熒光(Inadirect Immunofluorescence Assay，IFA)檢測(cè)石蠟切片與冰凍切片中鴨病毒性腫頭出血癥病毒(Duck Swollenhead。HaemorrhagicDisease Virus，DSHDV)方法建立，應(yīng)用IFA檢測(cè)DSHDV在實(shí)驗(yàn)感染鴨體內(nèi)侵染規(guī)律等系列研究，獲如下結(jié)果： 1. IFA檢測(cè)石蠟切片與冰凍切片中鴨病毒性腫頭出血癥病毒方法建立及其比較 用差速離心純化：

2、DSHDV，將純化：DSHDV免疫家兔制備兔抗DSHDV高免血清，并以High Q陰離子柱層析純化出兔抗DSHDV IgG，建立間接免疫熒光(IFA)檢測(cè)石蠟切片與冰凍切片中DSHDV的方法；利用建立的IFA對(duì)28日齡鴨人工感染DSHDV死亡鴨不同組織器官以進(jìn)行檢測(cè)。IFA檢測(cè)DSHDV感染死亡鴨石蠟切片肝臟為陽(yáng)性，檢測(cè)鴨瘟病毒、禽流感病毒(H5N1)、鴨病毒性肝炎病毒、鴨疫里默氏桿菌感染死亡鴨肝臟呈陰性；IFA檢測(cè)28日齡人工感染DS

3、HDV死亡鴨的不同組織器官石蠟切片，心、肝、脾、胰、肺、腎、法氏囊、食管、氣管、胸肌、胸腺、十二指腸、空腸、回腸、盲腸和直腸為陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性；該法具有直觀、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用于：DSHDV在感染鴨組織細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位具有良好效果，可用于DSHDV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷、病原在鴨組織細(xì)胞中分布研究。IFA檢測(cè)28日齡人工感染DSHDV死亡鴨的不同組織器官冰凍切片，心、肝、脾、胰、肺、腎、法氏囊、食管、氣管、胸肌、胸腺、哈德氏腺、十二指腸、空腸

4、、回腸、盲腸和直腸為陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性；該法敏感性高于石蠟切片且能快速出結(jié)果，可用于臨床快速診斷研究。 2. DSHDV在實(shí)驗(yàn)感染鴨體內(nèi)侵染規(guī)律的研究 2．1 DSHDV實(shí)驗(yàn)感染鴨臨床病理學(xué)發(fā)展規(guī)律 采用肌注、口服和滴鼻三種途徑感染28日齡北京鴨。感染鴨發(fā)病癥狀：病鴨初期精神沉郁，不愿走動(dòng)，隨著病程的加劇，臥地不起，食欲減退，被毛凌亂，個(gè)別鴨流血淚，鼻腔流血性分泌物(90％)。并開(kāi)始出現(xiàn)特征性癥狀：頭部腫脹(100％)

5、，眼結(jié)膜充血、出血呈紅色，排灰白色或草綠色稀糞甚至血便。眼觀病理變化：心冠脂肪有少量出血斑。頭部頸部下黃色膠凍樣水腫(80％)。胸腺出血嚴(yán)重，表面和切面有大小不等壞死點(diǎn)(70％)。肝臟呈橙黃色或土黃色，表面有大小不等的出血斑(85％)。心包有淡黃色積液(50％)。腎臟彌漫性出血。氣管環(huán)狀出血，滴鼻組多見(jiàn)(70％)。法氏囊嚴(yán)重出血。食道彌漫性出血形成條狀出血帶，口服組多見(jiàn)。泄殖腔黏膜初期有出血，后期壞死(50％)。脾腫大且呈深黑色，其上有

6、白色壞死灶(50％)。 2．2 DSHDV在實(shí)驗(yàn)感染鴨體內(nèi)侵染規(guī)律 2．2．1肌注組侵染規(guī)律經(jīng)肌注感染90min后最早能從腎臟中檢出病毒抗原；感染后6d僅不能從皮膚、腦、氣管、哈德氏腺和腺胃中檢測(cè)出抗原，該時(shí)間段也是病毒達(dá)到分布的高峰時(shí)期；從不同的時(shí)間的檢測(cè)情況可以看出，經(jīng)肌注感染病毒在鴨體內(nèi)分布最為廣泛的時(shí)間段為感染后12h～6d。 2．2．2口服組侵染規(guī)律 DS：HDV經(jīng)口服途徑感染初期腎臟、腸道、胸

7、腺、法氏囊的陽(yáng)性信號(hào)較強(qiáng)，而肺臟、心臟陽(yáng)性信號(hào)弱。感染中期大多數(shù)組織都檢測(cè)到了陽(yáng)性信號(hào)，其中腎臟、腸道陽(yáng)性信號(hào)有所增強(qiáng)，脾臟、肌肉、氣管開(kāi)始檢測(cè)到陽(yáng)性；哈德氏腺、腦、皮膚、腺胃在感染的整個(gè)過(guò)程都無(wú)陽(yáng)性信號(hào)出現(xiàn)。 2．2．3滴鼻組侵染規(guī)律 DSHDV經(jīng)滴鼻感染后4h最早能從腎臟腎小管上皮細(xì)胞漿中檢出病毒抗原；感染后12h，能夠從肝臟、腎臟、十二指腸和回腸中檢出病毒抗原；感染后3d，僅不能從腦、腺胃、皮膚、哈德氏腺中檢測(cè)出抗

8、原。所以經(jīng)過(guò)滴鼻途徑感染DSHDV后24h～6d時(shí)間段是病毒達(dá)到分布的高峰時(shí)期；從不同的時(shí)間的檢測(cè)情況可以看出，經(jīng)滴鼻感染病毒在鴨體內(nèi)分布最為廣泛的時(shí)間段為感染后3d～6d。 綜上所述，鴨胚是：DSHDV增殖的良好宿主平臺(tái)，運(yùn)用建立的IFA對(duì)人工感染DSHDV后石蠟切片與冰凍切片中病毒在鴨體內(nèi)的分布規(guī)律進(jìn)行研究表明：IFA檢測(cè)28日齡鴨人工感染DSHDV死亡鴨的心、肝、脾、胰、肺、腎、法氏囊、食管、氣管、胸肌、胸腺、哈德氏腺、十