小偃麥的分子原位雜交鑒定及高分子量谷蛋白突變體分析.pdf

1、小麥的野生近緣植物中間偃麥草經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的自然選擇，擁有許多抗逆、抗病蟲(chóng)等優(yōu)異基因。通過(guò)人工遠(yuǎn)緣雜交方法獲得的小偃麥材料是十分重要的小麥遺傳改良材料。 本研究以中間偃麥草以及普通小麥一中間偃麥草雜交后代中2、中4、TA2A2為材料，用含小麥25S-5．8S-18S rRNA和15S rRNA基因的rDNA作探針，進(jìn)行熒光分子原位雜交。根據(jù)小麥-中間偃麥草后代中的中間偃麥草染色體含有25S-5．8S-18S rRNA基因和15SrRN

2、A基因位點(diǎn)的情況可以將其分成以下3種類型：中2類型，中4類型和TA2A2類型。這些位點(diǎn)的差異，可以作為鑒定不同小偃麥類型的分子標(biāo)記。 利用SDS-PAGE對(duì)普通小麥一中間偃麥草雜交后代的高分子量谷蛋白進(jìn)行分析，結(jié)果表明利用高分子量谷蛋白譜帶的差異也可鑒別中2、中5、YUAN16-3、TA2A2等不同類型的小偃麥材料。此外，通過(guò)SDS-PAGE篩選出一個(gè)小偃54的高分子量谷蛋白純合突變體，它與野生型的高分子量谷蛋白譜帶相比存在顯著

3、差異。 利用基因組PCR的方法，從小偃54及其突變體中擴(kuò)增了高分子量谷蛋白突變亞基基因1By15的編碼區(qū)序列，采用特異引物步行的方法進(jìn)行測(cè)序并獲得了基因的全序列。利用DNAMAN生物軟件，我們對(duì)野生型和突變型1By15的核苷酸序列及氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)與野生型1By15 相比，突變型1By15缺失了在中間重復(fù)區(qū)917bp—1007bp之間90-bp的片段。此片段缺失沒(méi)有破環(huán)開(kāi)放閱讀框的繼續(xù)翻譯，導(dǎo)致形成的蚩白亞基缺少了3