半枝蓮提取物對白血病K562細胞增殖與凋亡的影響及相關機制的探討.pdf

1、目的：探討半枝蓮提取物對白血病K562細胞增殖及凋亡的作用,以及對K562細胞血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及其受體-1(VEGFR-1)表達的影響。
　　方法：實驗組(半枝蓮提取物0.1mg/ml,0.2mg/ml,0.5mg/ml,1.0mg/ml)及空白對照組(半枝蓮提取物0mg/ml),作用于K562細胞24、48、72小時后:在倒置顯微鏡下觀察K562細胞形態(tài);MTT法檢測各組對K562細胞增殖情況的影響;流式細胞儀技術檢

2、測K562細胞凋亡及細胞周期分布情況。各實驗組及空白對照組作用于 K562細胞48小時后:RT-PCR法檢測 K562細胞中 VEGF、VEGFR-1mRNA的表達;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測 K562細胞上清液中VEGF的濃度。
　　結(jié)果：1、倒置顯微鏡顯示隨實驗組藥物濃度增加及作用時間的延長,K562細胞數(shù)目減少。細胞碎片增多,K562細胞出現(xiàn)核碎裂等凋亡形態(tài)學改變。2、MTT法檢測結(jié)果表明,半枝蓮提取物在較低濃度(0.

3、1mg/ml,0.2mg/ml)作用較短時間(24h)時,對K562細胞的增殖抑制不明顯,與空白對照組相比無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。在半枝蓮提取物0.5mg/ml作用24h開始,對K562細胞有明顯的抑制作用,與空白對照組相比(p<0.05),有統(tǒng)計學意義。且隨著藥物濃度的升高,及作用時間的延長,抑制率呈上升趨勢,各組間比較(p<0.05),有統(tǒng)計學意義。3、流式細胞儀結(jié)果顯示,半枝蓮提取物可以使K562細胞周期分布發(fā)生改變,表現(xiàn)為

4、G0/G1期細胞比例上升,S期及G2/M期細胞比例下降。且隨實驗組藥物濃度增加,K562細胞G0/G1期細胞比例呈逐漸上升趨勢,而S期及G2/M期細胞比例為逐漸下降趨勢;并且流式細胞儀顯示,隨實驗組藥物濃度升高及作用于K562細胞的時間延長,細胞凋亡率逐漸升高,且均高于空白對照組,各組間比較有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。4、RT-PCR顯示不同濃度半枝蓮提取物作用于K562細胞48h后均可降低VEGFmRNA及VEGFR-1mRNA的表

5、達,目的基因與β-actin灰度比值逐漸下降,并有一定的濃度依賴趨勢,各組間比較有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。在0.2mg/ml組時電泳條帶較空白對照組明顯變淺,1.0mg/ml組較其余各組比較條帶最淺。5、ELISA法結(jié)果顯示空白組K562細胞上清液中VEGF的濃度為996.78±14.76pg/ml,各組半枝蓮提取物(0.1mg/ml,0.2mg/ml,0.5mg/ml,1.0mg/ml)作用K562細胞48h后,VEGF濃度分別下

6、降為760.30±9.47 pg/ml,709.69±11.23 pg/ml,549.46±8.63 pg/ml,452.78±13.59 pg/ml,各組間比較有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　結(jié)論：(0.1 mg/ml-1.0mg/ml)的半枝蓮提取物在(24h-72h)之間能抑制K562細胞的增殖,改變細胞周期分布,使細胞由G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變的過程受阻,誘導K562細胞凋亡,并呈一定的濃度及時間依賴趨勢。其作用機制可能