空腸彎曲菌基因突變與致GBS的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、目的： 空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni，C．jejuni，Cj)是細(xì)菌性腹瀉最常見的致病菌之一，吉蘭一巴雷綜合征(Guillain-Barre syndrome，GBS)是C.jejuni感染后的嚴(yán)重并發(fā)癥。近年來隨著神經(jīng)生理和病理學(xué)的研究進(jìn)展，將GBS重新劃分為急性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(AIDP)、急性運(yùn)動軸索性神經(jīng)病(AMAN)、急性運(yùn)動感覺性軸索性神經(jīng)病(AMSAN)、Miller-Fisher

2、綜合征(MFS)等幾種亞型。GBS的發(fā)生常與C．jejuni某些特定的血清型有關(guān)，在我國最常見的為O:19。 本研究從基因突變的角度出發(fā)，選擇本地區(qū)的具有致GBS致病性的空腸彎曲菌菌株，針對不同的基因片段(鞭毛flaA，脂寡糖wla基因簇)，與NCTC11168序列比對分析，觀察基因突變與致GBS的關(guān)聯(lián)。 方法： 細(xì)菌培養(yǎng)選取 AMAN型GBS病人來源的Cjejuni菌株，菌株經(jīng)雞、猴等動物模型證實(shí)為GBS的A

3、MAN型致病菌株。血清分型為pennerO:19型。采用李春巖院士的培養(yǎng)方法培養(yǎng)Cj。 DNA提取應(yīng)用promega公司的Wizard基因提取試劑盒，提取Cj基因組DNA。 PCR擴(kuò)增參考以往文獻(xiàn)，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)電泳證實(shí)PCR產(chǎn)物。 測序PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳證實(shí)后，由上海生物公司測序。 序列分析應(yīng)用DNAstar4.0軟件和。NCBI數(shù)據(jù)庫的BLAST，與己公布基因組全序列的空腸彎曲菌NCTC11168

4、菌株序列進(jìn)行對比分析。 結(jié)果： 1 本研究菌株與NCTC11168菌株序列分析結(jié)果表示在兩株菌株之間，核苷酸序列同源性達(dá)97％以上。 2 naA基因和wla基因簇不同基因片斷，核苷酸突變的數(shù)量不同，以flaA基因和wlaF突變最多，分別為20個核苷酸突變；15個核苷酸突變。 3 氨基酸變異與核苷酸突變相似，以flaA基因和wlaF最多，分別13個氨基酸變異；60個氨基酸變異，并且由于wlaF序列存在5