普羅布考對(duì)血管性癡呆大鼠經(jīng)由JNK途徑的腦保護(hù)作用.pdf

1、目的:血管性癡呆(vascular dementia，VD)指腦血管病變引起的腦損害所致的癡呆。是在Alzheimer病(AD)之后第二常見的癡呆。發(fā)病機(jī)制一般認(rèn)為是腦血管病的病灶涉及額葉、顳葉及邊緣系統(tǒng)，或病灶損害了足夠容量的腦組織，導(dǎo)致高級(jí)認(rèn)知功能的嚴(yán)重受損。目前對(duì)于VD的分子機(jī)制研究已日漸成為科學(xué)家們研究的熱點(diǎn)問題。主要有興奮性氨基酸毒性、膽堿能缺陷、自由基損傷、炎癥反應(yīng)、神經(jīng)細(xì)胞凋亡等。近年來，神經(jīng)細(xì)胞凋亡與VD的關(guān)系越來越受到

2、科學(xué)家們的關(guān)注。
　　c-Jun氨基末端激酶(JNK)又稱應(yīng)激激活蛋白激酶(SAPK)，是絲裂原激活的蛋白激酶(MAPKs)超家族的一員。大量實(shí)驗(yàn)提示，JNK信號(hào)通路在細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激及多種人類疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。已有研究表明，應(yīng)用特異性JNK抑制劑可有效地阻斷JNK信號(hào)通路從而有效地調(diào)控細(xì)胞凋亡。
　　普羅布考是一種非他汀類血脂調(diào)節(jié)藥物。目前國(guó)內(nèi)外研究表明，普羅布考在AD大鼠中具有顯著的腦保護(hù)作用，

3、而其在VD中的治療鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過觀察VD大鼠海馬組織神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況及JNK及P-JNK水平的變化，探討JN信號(hào)通路在VD中的作用及普羅布考對(duì)VD大鼠的腦保護(hù)作用機(jī)制，為VD的臨床治療及普羅布考的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法:選取健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、普羅布考組，每組10只，采用永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法建立血管性癡呆大鼠模型。普羅布考組灌胃給予普羅布考500mg/k

4、g/d，假手術(shù)組和模型組給予等量溶劑。給藥8周后，行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，對(duì)各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行測(cè)試，行為學(xué)測(cè)試完畢后取材，采用流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡程度，用免疫組織化學(xué)方法和免疫印跡法(westernblot)測(cè)定海馬區(qū)JNK和p-JNK蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.行為學(xué)測(cè)定
　　1.1 逃避潛伏期結(jié)果水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)表明，從訓(xùn)練的第2天開始至結(jié)束，三組大鼠逃避潛伏期均有下降的趨勢(shì)，說明訓(xùn)

5、練可以增強(qiáng)學(xué)習(xí)能力。各組大鼠間學(xué)習(xí)記憶能力存在差異(F=15.34，P＜0.05)，與假手術(shù)組相比，模型組與普羅布考組大鼠第1-4天的逃避潛伏期時(shí)間均明顯延長(zhǎng)(P＜0.05);與模型組相比，普羅布考組大鼠第2-4天的逃避潛伏期時(shí)間明顯縮短(P＜0.05)，第1天無顯著差異(P＞0.05)。
　　1.2 穿越平臺(tái)次數(shù)結(jié)果第5天測(cè)定的穿越平臺(tái)次數(shù)表示大鼠的空間記憶能力，穿越平臺(tái)次數(shù)越多記憶能力越強(qiáng)。與假手術(shù)組相比，模型組大鼠穿越平臺(tái)次

6、數(shù)明顯減少(P＜0.05);與模型組相比，普羅布考組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增多(P＜0.05);普羅布考組與假手術(shù)組相比，大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)無顯著差異(P＞0.05)。各組大鼠隨著訓(xùn)練時(shí)間的推移，訓(xùn)練次數(shù)的增多，尋找平臺(tái)的方式在不斷變化，尋找平臺(tái)的時(shí)間都在縮短，說明學(xué)習(xí)鍛煉可以增強(qiáng)空間記憶能力。
　　2.普羅布考對(duì)大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞周期定量分析表明，假手術(shù)組未見明顯的凋亡峰，雖也有自發(fā)性細(xì)胞凋亡發(fā)生，但細(xì)

7、胞凋亡百分率很低，僅為(5.06±2.52)％;模型組細(xì)胞凋亡率為(11.27±2.67)％，較假手術(shù)組顯著增高(P＜0.05);普羅布考組細(xì)胞凋亡率為(6.57±1.47)％，較模型組顯著降低(P＜0.05);普羅布考組與假手術(shù)組相比較雖然也有一定程度的增高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.普羅布考對(duì)大鼠海馬CA1區(qū)JNK及p-JNK蛋白表達(dá)結(jié)果的影響
　　3.1 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果大鼠海馬CA1區(qū)p-JNK、

8、JNK蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞情況:假手術(shù)組和普羅布考組大鼠海馬區(qū)僅見很少的p-JNK陽性神經(jīng)元。模型組部分海馬細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞帶不連貫，可見較多的p-JNK陽性神經(jīng)元。模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠海馬CA1區(qū)p-JNK蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多(P＜0.05);與模型組相比，普羅布考組大鼠海馬CA1區(qū)p-JNK蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少(P＜0.05);普羅布考組與假手術(shù)組相比，大鼠海馬CA1區(qū)p-JNK蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)無明顯

9、差異(P＞0.05)。三組間比較，JNK蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)均無明顯差異(F=0.54，P＞0.05)。
　　3.2 western blot結(jié)果大鼠海馬p-JNK、JNK蛋白的表達(dá)水平情況:模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠海馬區(qū)p-JNK蛋白表達(dá)水平明顯增高(P＜0.05);普羅布考組與模型組相比，普羅布考組大鼠海馬區(qū)p-JNK蛋白表達(dá)水平明顯降低(P＜0.05);普羅布考組與假手術(shù)組相比，大鼠海馬區(qū)p-JNK蛋白的表達(dá)水平也有

10、差異，普羅布考組顯著高于假手術(shù)組(P＜0.05)。三組間比較，大鼠海馬區(qū)JNK蛋白的表達(dá)水平均無明顯差異(P＞0.05)。
　　三組間p-JNK/JNK值的比較:模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠海馬區(qū)p-JNK/JNK值明顯增高(P＜0.05);普羅布考組與模型組相比，普羅布考組大鼠海馬區(qū)p-JNK/JNK值明顯降低(P＜0.05);普羅布考組與假手術(shù)組相比，大鼠海馬區(qū)p-JNK/JNK值略增高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)