不動(dòng)桿菌屬OXA-23及OXA-24-40型碳青霉烯酶?jìng)鞑C(jī)制研究.pdf

1、不動(dòng)桿菌屬是院內(nèi)感染重要致病菌之一，以鮑曼-醋酸鈣不動(dòng)感桿菌復(fù)合體為主，可引起肺炎、皮膚軟組織感染、傷口感染、尿路感染、腦膜炎以及血流感染等。近年來(lái)，不動(dòng)桿菌屬碳青霉烯耐藥率不斷上升，給臨床用藥與治療形成了極大的挑戰(zhàn)，而不動(dòng)桿菌屬碳青霉烯耐藥的主要機(jī)制之一為產(chǎn)OXA型碳青霉烯酶。本研究對(duì)國(guó)內(nèi)不動(dòng)桿菌屬OXA-23與OXA-24/40型碳青霉烯酶的傳播機(jī)制進(jìn)行了深入分析。
　　OXA-23酶是不動(dòng)桿菌屬中最常見(jiàn)的OXA類碳青霉烯酶。

2、本課題組于2009年1月至2010年12月在全國(guó)18個(gè)省、28家醫(yī)院收集了產(chǎn)OXA-23型碳青霉烯酶的60株鮑曼不動(dòng)桿菌與3株院內(nèi)不動(dòng)桿菌，這些菌株來(lái)自不同省市地區(qū)以代表不同的遺傳背景。研究通過(guò)PCR擴(kuò)增blaOXA-23基因周?chē)Y(jié)構(gòu)，S1/ApaI-PFGE-Southern blot明確blaOXA-23基因定位，并通過(guò)微量肉湯稀釋法明確菌株美羅培南、亞胺培南的MIC值，探討其耐藥性與基因定位、拷貝數(shù)的關(guān)系。此外，借助電轉(zhuǎn)化、接合轉(zhuǎn)

3、移等方式檢測(cè)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移能力，并對(duì)代表性質(zhì)粒進(jìn)行了高通量測(cè)序與序列分析。
　　研究結(jié)果顯示，攜帶染色體編碼blaOXA-23基因的共有35株鮑曼不動(dòng)桿菌;而25株鮑曼不動(dòng)桿菌與3株院內(nèi)不動(dòng)桿菌則攜帶blaOXA-23基因陽(yáng)性質(zhì)粒，其中3株鮑曼不動(dòng)桿菌亦攜帶一個(gè)位于定位于染色體上的blaOXA-23基因拷貝。blaOXA-23基因的定位、拷貝數(shù)對(duì)細(xì)菌碳青霉烯耐藥性的影響不明顯。研究中僅發(fā)現(xiàn)兩種攜帶blaOXA-23基因的質(zhì)粒，大小分別

4、約為78kb與50kb。78kb的質(zhì)粒以pAZJ221為代表，可通過(guò)電轉(zhuǎn)化及接合的方式進(jìn)行轉(zhuǎn)移，為23株鮑曼不動(dòng)桿菌及3株院內(nèi)不動(dòng)桿菌中所攜帶。兩株鮑曼不動(dòng)桿菌攜帶50kb質(zhì)粒，該質(zhì)粒僅能通過(guò)電轉(zhuǎn)化進(jìn)行轉(zhuǎn)移。Tn2009是國(guó)內(nèi)最常見(jiàn)的攜帶blaOXA-23基因的轉(zhuǎn)座子(n=57)，其次為T(mén)n2008(n=5)和Tn2006(n=1）。完成了質(zhì)粒pAZJ221的全序列，其功能結(jié)構(gòu)主要為兩部分:Tn2009以及接合元件。
　　上述研究

5、結(jié)果表明，blaOXA-23基因定位于染色體上的比例較定位于質(zhì)粒的比例稍高，需警惕OXA-23型碳青霉烯酶的克隆傳播。Tn2009是我國(guó)不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌中最常見(jiàn)的攜帶blaOXA-23基因的轉(zhuǎn)座子，其與可接合性質(zhì)粒pAJ221促進(jìn)了OXA-23型碳青霉烯酶在中國(guó)的傳播。因此水平傳播在blaOXA-23基因的傳播中起著重要作用。
　　其次，本研究以前期在全國(guó)2880株不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌中篩查到的11株產(chǎn)OXA24/40-like碳青霉烯酶

6、的不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌作為研究對(duì)象，對(duì)不動(dòng)桿菌屬OXA-24/40-like碳青霉烯酶?jìng)鞑C(jī)制進(jìn)行了探討。除1株鮑曼不動(dòng)桿菌外，其余10株細(xì)菌攜帶的blaOXA24/40-like基因定位于質(zhì)粒上。通過(guò)PFGE分型，11株細(xì)菌被歸為10種不同克隆型，僅2株鮑曼不動(dòng)桿菌屬同一克隆型。借助質(zhì)粒抽提與PCR walking、質(zhì)粒高通量測(cè)序與序列分析等手段，發(fā)現(xiàn)9株細(xì)菌中blaOXA24/40-like基因均位于XerC/XerD同源重組系統(tǒng)中。通過(guò)

7、比對(duì)質(zhì)粒復(fù)制子序列發(fā)現(xiàn)，2株鮑曼不動(dòng)桿菌與1株pitti不動(dòng)桿菌攜帶的blaOXA-72陽(yáng)性質(zhì)粒屬于同一類型，而其他6株細(xì)菌攜帶的質(zhì)粒類型各不相同。部分質(zhì)粒結(jié)構(gòu)中存在質(zhì)粒移動(dòng)蛋白與VapBC毒素-抗毒素系統(tǒng)。經(jīng)過(guò)對(duì)質(zhì)粒pA2503進(jìn)行序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，該質(zhì)粒與分離于同一時(shí)期、同一家法國(guó)醫(yī)院的兩個(gè)質(zhì)粒pMCCU3、 pMMD序列較為相似。
　　目前國(guó)內(nèi)不動(dòng)桿菌屬攜帶的blaOXA24/40-like基因以blaOXA-72基因?yàn)橹?，尚?/p>