甘藍(lán)型油菜磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因ihpRNA種子特異性表達(dá)載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、油菜是世界范圍內(nèi)廣泛種植的油料作物，是世界食用植物油和植物蛋白的重要來源，在國際農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易中占有重要的地位。植物油是栽培油菜的主要農(nóng)產(chǎn)品，它不僅是人和動物必須脂肪酸的主要來源，也是油漆、潤滑劑、化妝品、尼龍等化工產(chǎn)品的重要原料。我國的油菜種植面積(主要在長江流域)超過一億畝，占世界種植面積的1/3，為我國人民提供了60％以上的食用油。然而與加拿大等國家相比，我國多數(shù)油菜品種的含油量偏低：國際油菜籽的平均含油量大約42％，我國油菜籽的平均

2、含油量僅為35％。因此，高含油量油菜品質(zhì)育種具有十分重要的現(xiàn)實意義。 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)與油菜含油量有著密切的關(guān)系。其間接控制了油脂、蛋白質(zhì)生物合成的共同底物磷酸烯醇式丙酮酸的流向，從而決定植物種子蛋白質(zhì)/油脂含量比例。我們利用RNAi技術(shù)抑制PEPC，使可溶性糖更加充分地流入種子中的脂肪代謝途徑，以望獲得高含油量的轉(zhuǎn)基因油菜。本研究作了以下工作并取得相關(guān)結(jié)果： 1、該研究從油菜中分別克隆出了napin基

3、因啟動子(種子特異性啟動子)及pepc基因v，與已報道的序列的同源性分別達(dá)到了100％和93％，并以此構(gòu)建了油菜種子特異表達(dá)的pepc基因ihpRNA載體，經(jīng)質(zhì)粒PCR．及酶切檢測證實該載體構(gòu)建成功。通過凍融法將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌LBA4404，并經(jīng)菌落PCR得到驗證。Pepc正反義鏈序列已分別登錄到GenBank，序列號為EF53920和EF565860。 2、將攜帶表達(dá)載體的農(nóng)桿菌LBA4404浸染湘油15號子葉節(jié)外植體。