纈沙坦抑制外源性血管緊張素Ⅱ促ApoE---小鼠動脈粥樣硬化的免疫機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面展開論述:
　　第一部分 纈沙坦對外源性血管緊張素Ⅱ促ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化中斑塊進(jìn)展及穩(wěn)定性的研究
　　目的：觀察纈沙坦干預(yù)外源性血管緊張素Ⅱ促ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化進(jìn)程中小鼠斑塊的穩(wěn)定性。
　　方法：建立對照組，血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）組，纈沙坦干預(yù)AngⅡ組的ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化模型，干預(yù)8周后，檢測三組小鼠的血壓、心率變化，體重以及血脂的變化；應(yīng)用油紅O染色檢測小

2、鼠血管及主動脈根部斑塊面積，免疫組化檢測斑塊穩(wěn)定相關(guān)指標(biāo)，Real-Time RT-PCR及Western-blot方法檢測小鼠斑塊內(nèi)MMP-2，MMP-9的表達(dá)。
　　結(jié)果：與對照組比較，AngⅡ刺激組ApoE-/-小鼠血壓增高，AS進(jìn)展加劇，且斑塊趨于不穩(wěn)定，RT-PCR和WB檢測血管斑塊MMP-2，MMP-9表達(dá)增加。而用纈沙坦干預(yù)組，血壓低于AngII刺激組，且則逆轉(zhuǎn)了AngⅡ刺激組的AS的進(jìn)展，而且使斑塊趨于穩(wěn)定，且降低

3、了MMP-2，MMP-9的表達(dá)。三組之間的心率，體重，血脂均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：纈沙坦可以使外源性血管緊張素Ⅱ促ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化進(jìn)程中斑塊趨于穩(wěn)定。
　　第二部分 纈沙坦影響外源性血管緊張素Ⅱ促ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化進(jìn)程中的機(jī)體免疫變化的研究
　　目的：動脈粥樣硬化（AS）的發(fā)生發(fā)展與適應(yīng)性免疫密切相關(guān)，免疫機(jī)制亦可以影響斑塊的不穩(wěn)定性，由于第一部分證實(shí)了纈沙坦逆轉(zhuǎn)了血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）

4、促 ApoE-/-小鼠 AS進(jìn)展的斑塊不穩(wěn)定，而具體免疫機(jī)制不明，本部分檢動物模型各組中免疫現(xiàn)象的改變，進(jìn)一步探索纈沙坦促斑塊穩(wěn)定性的免疫學(xué)機(jī)制。
　　方法：建立對照組，血管緊張素Ⅱ組，纈沙坦干預(yù)血管緊張素Ⅱ組的ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化模型，干預(yù)8周后，用流式細(xì)胞技術(shù)檢測各組小鼠體內(nèi)淋巴結(jié)內(nèi)免疫細(xì)胞群的變化，用酶聯(lián)免疫印跡（ELISA）方法檢測小鼠血清中個炎性因子的變化，用實(shí)時定量（RT-PCR）方法檢測小鼠主動脈各免疫因子

5、的變化，用免疫組化方法檢測小鼠斑塊內(nèi)炎癥細(xì)胞的浸潤及CD4+細(xì)胞的浸潤。
　　結(jié)果：流式細(xì)胞技術(shù)檢測了AngⅡ小鼠脾臟內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞的變化趨于Th1，Th17反應(yīng)，而抑制了Th2，Tregs表達(dá)，且增強(qiáng)了小鼠體內(nèi)脾臟細(xì)胞的成熟度，而纈沙坦組則表現(xiàn)的相反的結(jié)果，ELISA方法檢測的小鼠體內(nèi)血清中，Ang Ⅱ組Th1，Th17細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子譜比對照組明顯降低，而纈沙坦組則使Ang Ⅱ組的趨于Th2，Tregs的細(xì)胞因子譜的分

6、泌。RT-PCR檢測的小鼠主動脈基因的表達(dá)與ElISA檢測細(xì)胞因子譜一致。
　　結(jié)論：纈沙坦逆轉(zhuǎn)了AngⅡ促小鼠AS進(jìn)展中適應(yīng)性免疫的失衡，進(jìn)而使斑塊趨于穩(wěn)定的免疫學(xué)機(jī)制。
　　第三部分 纈沙坦通過IL-5抗血管緊張素II促ApoE-/-動脈粥樣硬化進(jìn)程的作用研究
　　目的：纈沙坦抗AngⅡ促ApoE-/-動脈粥樣硬化進(jìn)程中，誘導(dǎo)了Th2的分化，而尤其升高了Th2分泌的細(xì)胞因子IL-5，本部分通過中和IL-5細(xì)胞因子，

7、觀察纈沙坦抗AS進(jìn)展的作用。
　　方法：本部分實(shí)驗(yàn)動物分為兩組，分別為對照組纈沙坦干預(yù)外源性AngⅡ促ApoE-/-小鼠模型腹腔注射同型蛋白，干預(yù)組為纈沙坦干預(yù)外源性AngⅡ促ApoE-/-小鼠模型腹腔注射IL-5中和抗體，觀察兩組小鼠血壓，以及主動脈根部的斑塊進(jìn)展及斑塊的穩(wěn)定性及炎癥細(xì)胞的浸潤情況。
　　結(jié)果：IL-5抗體中和組加重了AS的進(jìn)展，而對小鼠血壓沒有影響。
　　結(jié)論：纈沙坦通過Th2分泌的IL-5發(fā)揮了抗