大蒜素抗apoE---小鼠動脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究大蒜素對高脂飲食誘導(dǎo)的載脂蛋白E基因敲除小鼠（apolipoprotein E gene knockout，apoE-/-）動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響，并從抗炎及抗凋亡方面探討大蒜素干預(yù)動脈粥樣硬化進(jìn)展的作用機(jī)制。
　　方法：選取24只健康8周齡雄性apoE-/-小鼠，體質(zhì)量20-22g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后給予高脂飼料構(gòu)建動脈粥樣硬化模型，8周后按照隨機(jī)數(shù)表發(fā)隨機(jī)分為3組：低劑量大蒜素組、高劑量大蒜素組和模型組，每組8只

2、，模型組每只給予0.5ml0.9%生理鹽水灌胃，低劑量組給予0.25ml0.9%生理鹽水+0.25ml大蒜素溶液灌胃，高劑量組給予0.5ml大蒜素溶液灌胃。大蒜素干預(yù)8周后處死小鼠，眼球取血，使用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測apoE-/-小鼠血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和C反應(yīng)蛋白含量，取主動脈根部作病理染色，蘇木素-伊紅染色觀察主動脈病理組織學(xué)變化，脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP缺口末端標(biāo)記法染色法檢測斑

3、塊內(nèi)的細(xì)胞凋亡，天狼星紅染色評估斑塊膠原含量，免疫組化染色檢測斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞含量、平滑肌細(xì)胞含量及凋亡相關(guān)蛋白B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2相關(guān)X蛋白（Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白因子的表達(dá)。將實驗所得數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性檢驗分析，符合條件者采用單因素方差分析結(jié)合方差分析，使用卡方檢驗百分?jǐn)?shù)比較，不符合條件者采用秩和檢驗，結(jié)果以?x±s表示，P＜0.05表示

4、差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：高、低劑量大蒜素均未對小鼠體質(zhì)量和血脂產(chǎn)生明顯影響（P＞0.05）；低劑量大蒜素顯著降低斑塊內(nèi)C反應(yīng)蛋白含量（P＜0.01），高劑量大蒜素也有降低C反應(yīng)蛋白的作用（P＜0.05）；蘇木素-伊紅染色結(jié)果顯示，模型組斑塊內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量死亡泡沫細(xì)胞和結(jié)晶的膽固醇，斑塊面積大，大蒜處理后斑塊面積減小，斑塊結(jié)構(gòu)趨于穩(wěn)定，小劑量大蒜素組具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP缺口末端標(biāo)記法染

5、色發(fā)現(xiàn)，低劑量大蒜素組斑塊內(nèi)凋亡面積顯著減少（P＜0.05），高劑量大蒜素組凋亡面積雖有減小趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。天狼星紅染色顯示，與模型組相比，大蒜素可增加膠原含量且結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；免疫組化結(jié)果顯示，低劑量大蒜素可減少斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞聚集，降低Bax、Caspase-3表達(dá)，增加Bcl-2表達(dá)（P＜0.01），與模型組及高劑量大蒜素組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），但平滑肌細(xì)胞含量各組之間未見明顯差