p38MAPK和ERK1-2信號通路在內毒素性休克誘發(fā)急性肺損傷大鼠肺組織HO-1表達過程中的作用.pdf

1、內毒素休克(endotoxic shock)是臨床危重病中常見的癥狀，可造成多器官損傷，其中以急性肺損傷(acute lung injury; ALI)常見，進一步可導致急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome; ARDS）。內毒素休克所致肺損傷其發(fā)病機制復雜，治療棘手，探討其發(fā)病機制并進行合理有效地治療仍是國內外研究的熱點。
　　 我們的前期研究結果表明，血紅素氧合酶-1(he

2、me oxygenase-1，HO-1)在內毒素休克肺損傷時表達增多，可對肺起到一定的保護作用[1]，明確其調節(jié)機制對臨床制定預防措施具有重要意義。P38MAPK和細胞外信號調節(jié)激酶1/2（extracellular signal-regulated kinases，ERK1/2）信號通路是絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein kinase，MAPK)通路中的重要通路之一，是生物體內重要的信號轉導分子，

3、在細胞分化、凋亡及炎癥等過程中起重要作用。有研究表明，人腎癌細胞內ERK的激活能誘導HO-1表達增多并抵抗細胞凋亡[2]，也有研究發(fā)現，體外培養(yǎng)的血管平滑肌細胞內受到外界刺激時，可通過p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信號通路誘導HO-1表達上調[3]。至于P38MAPK和ERK1/2信號通路是否介導內毒素休克大鼠受損肺臟HO-1的表達，目前尚未見報道。本課題擬通過建立大鼠內毒素休克肺損傷模型并給予P38MAPK和ERK1/2通

4、路的抑制劑來探討P38MAPK和ERK1/2信號通路對內毒素休克大鼠受損肺臟內HO-1表達的影響。
　　 第一部分:P38MAPK信號通路在內毒素休克誘發(fā)急性肺損傷大鼠肺組織中HO-1表達過程中的作用
　　 目的：探討P38MAPK信號通路在內毒休克誘發(fā)急性肺損傷大鼠肺組織中HO-1表達過程中的作用。
　　 方法清潔級雄性SD大鼠48只，體重180 g～200 g，采用隨機數字表法，隨機分為4組（每組12只）:對

5、照組（C組）、內毒素休克組（LS組）、內毒素休克+抑制劑組（LSS組）和抑制劑組（B組）。C組和LS組股靜脈輸注0.1 mlDMSO（二甲亞砜），LSS組和B組股靜脈P38MAPK阻斷劑SB2O35805μmol/kg（溶于0.1 ml10％二甲基亞砜）;30 min后，C組和B組分別給予0.5 ml生理鹽水，LS組和LSS組分別給予LPS（脂多糖）10 mg/kg（溶于0.5 ml生理鹽水），連續(xù)監(jiān)測平均動脈壓（mean arteri

6、al pressure，MAP），2h內LS組和LSS組MAP下降≥基礎血壓25％，認為模型制備成功。根據病理學切片和肺含水率評定肺損傷程度，測定SOD活性和MDA含量，應用熒光定量PCR技術和Western blot技術測定P38MAPK和HO-1的表達。
　　 結果與C組比較，LS組和LSS組SOD活性降低，病理學損傷評分、肺含水率和MDA含量升高，肺組織HO-1 mRNA和蛋白以及P38MAPK蛋白的表達上調（P均＜0.0

7、5），B組各指標差異無統計學意義（P均＞0.05）;與LS組比較，LSS組SOD活性升高，病理學損傷評分、肺含水率和MDA含量降低，肺組織HO-1 mRNA和蛋白表達上調，P38MAPK蛋白表達下調(P＜0.05)。
　　 結論抑制P38MAPK信號通路可導致內毒素性休克誘發(fā)急性肺損傷大鼠肺組織HO-1表達上調。
　　 第二部分ERK1/2信號通路在內毒素休克誘發(fā)急性肺損傷大鼠肺組織中HO-1表達過程中的作用
　　

8、 目的：探討ERK1/2信號通路在內毒素休克誘發(fā)急性肺損傷大鼠肺組織中HO-1表達過程中的作用。
　　 方法清潔級雄性SD大鼠48只，體重180 g～200 g，采用隨機數字表法，隨機分為4組（每組12只）;假手術組（S組）、內毒素休克組（SS組）、內毒素休克+阻斷劑組（SE組）和阻斷劑組（E組）。S組和SS組股靜脈輸注0.1 mlDMSO（二甲亞砜），SE組和E組股靜脈ERK1/2阻斷劑PD9805910μmol/kg（溶于

9、0.1 ml DMSO）;30min后，S組和E組分別給予0.5 ml生理鹽水，SS組和SE組分別給予LPS（脂多糖）10 mg/kg（溶于0.5 ml生理鹽水），連續(xù)監(jiān)測平均動脈壓(mean arterial pressure，MAP)，2h內SS組和SE組MAP下降≥基礎血壓25％，認為模型制備成功。根據病理學切片和肺含水率評定肺損傷程度，測定SOD活性和MDA含量，應用熒光定量PCR技術和Western blot技術測定ERK1/

10、2和HO-1的表達，判斷ERK1/2通路在內毒素休克大鼠肺臟HO-1表達過程中的作用。
　　 結果 SS組的病理學評分、肺含水率、MDA含量明顯高于S組和E組(P均＜0.05)，但低于SE組(P＜0.05); SS組SOD活性明顯低于S組和E組(P均＜0.05)，但高于SE組(P均＜0.05); SS組ERK1/2蛋白、HO-1 mRNA和蛋白表達明顯高于SE組、S組和E組(P＜0.05);上述指標在S組和E組之間差異無統計學意