大環(huán)雙內酯化合物FW-04-806對HER2陽性胃癌細胞的抗腫瘤作用及其機制研究.pdf

1、目的：研究FW-04-806對HER2陽性胃癌細胞的體內外抗腫瘤活性及其機制，探討其與Lapatinib的聯(lián)合作用，為大環(huán)雙內酯化合物FW-04-806這種潛在的Hsp90抑制劑的開發(fā)應用提供理論依據(jù)。
　　方法：（1）四甲基偶氮唑藍(MTT)法體外檢測FW-04-806對HER2陽性胃癌細胞NCI-N87、OE19的增殖抑制作用；（2）集落形成法檢測FW-04-806對HER2陽性胃癌細胞的集落形成抑制能力；（3）通過 FITC

2、/PI雙染法檢測 FW-04-806對HER2陽性胃癌細胞的凋亡作用；（4）通過PI染色法檢測FW-04-806對胃癌細胞周期的影響；（5）Western blot法檢測對胃癌細胞蛋白的影響；（6）免疫共沉淀法檢測蛋白間相互作用；（7）免疫組化觀察Hsp90客戶蛋白的表達變化；（8）體內異種移植瘤模型檢測FW-04-806的抑瘤率。
　　結果：（1）FW-04-806呈劑量依賴性抑制胃癌細胞 NCI-N87、OE19、AGS、SG

3、C-7901的增殖，對應半數(shù)抑制率分別為24.17、29.61、58.13、60.59μmol·L-1，結果顯示 FW-04-806對 HER2陽性胃癌細胞（NCI-N87、OE19）更敏感；（2）長期集落形成實驗結果顯示，F(xiàn)W-04-806對HER2陽性胃癌細胞NCI-N87、OE19的集落形成能力有明顯的抑制作用；（3）隨著FW-04-806作用NCI-N87和OE19細胞藥物濃度的增加，流式細胞儀檢測到的細胞凋亡率逐漸增加；（4）

4、FW-04-806明顯改變細胞周期，減少S期，阻滯胃癌細胞周期于G2-M期；（5）FW-04-806阻滯HER2下游細胞信號通路，抑制HER2、Akt和ERK的磷酸化，增加凋亡蛋白cleaved caspase3、cleaved parp的表達；（6）免疫共沉淀結果顯示，F(xiàn)W-04-806作用胃癌細胞OE19，誘使Hsp90/CDC37復合物解離，減少CDC37與Hsp90結合（；7）免疫組化切片圖可以觀察到，F(xiàn)W-04-806明顯減少

5、Hsp90客戶蛋白HER2、Akt的表達；（8）FW-04-806在異種移植瘤模型中有效抑制腫瘤生長，與對照組相比，200mg/k g實驗組抑瘤率為48.0％，P<0.01，差異具有統(tǒng)計學意義；（9)FW-04-806聯(lián)合Lapatinib具有協(xié)同作用，使增殖抑制和凋亡誘導增強。
　　結論：（1）FW-04-806對HER2陽性的胃癌細胞具有良好的體內外抗腫瘤作用。（2）FW-04-806可能是一種潛在的Hsp90抑制劑，通過干擾