腺相關(guān)病毒介導的SOX9和OP1雙基因載體聯(lián)合體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變椎間盤的生物學效應.pdf

1、目的:建立兔椎間盤退變模型;檢測腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus，AAV）介導的成骨蛋白-1(OP1)和SOX9雙基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染對兔退變椎間盤的生物學效應。
　　 方法:成年新西蘭大白兔通過針刺纖維環(huán)法建立椎間盤退變模型，造模后3周分別進行MRI檢測，觀察造模椎間盤變化，確認兔退變椎間盤模型造模成功。將造模成功的動物隨機分為五組(n=5)，分別A組:雙基因組（rAAV2-hSox9+rAAV2-hOp1）B

2、組:OP1組(rAAV2-hOp1)C組:SOX9組(rAAV2-hSox9)D組:EGFP組(rAAV2-EGFP)E組:PBS對照組。分別于造模椎間盤髓核內(nèi)注射20μ L雙基因組混合液（配制比例1∶1）、rAAV-OP1、rAAV-SOX9、rAAV-EGFP、PBS磷酸鹽緩沖液，于手術(shù)后3、6、9周后行核磁共振掃描觀察退變椎間盤變化情況，同時取退變椎間盤組織，RT-PCR方法觀察Ⅱ型膠原mRNA及蛋白多糖mRNA的變化。
　

3、　 結(jié)果:基因轉(zhuǎn)染后3周、6周、9周時，核磁共振掃描證實A、B、C組與D、E組，退變椎間盤T2加權(quán)像的信號強度明顯恢復，A組與B組、C組T2加權(quán)像的信號強度兩兩比較顯示具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05);基因轉(zhuǎn)染后3周、6周、9周時，RT-PCR法證實A組、B組、C組在不同轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)了Ⅱ型膠原及蛋白多糖mRNA的表達，A組Ⅱ型膠原及蛋白多糖mRNA表達量均高于其他各組，比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);B、C組間Ⅱ型膠原mRNA