白芍總苷對系統(tǒng)性紅斑狼瘡CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分TGP對系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者CD4+T細(xì)胞中CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子影響
　　 目的:研究白芍總苷(TotalglucosidesofPaeony,TGP)對系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SystemicLupusErythematosus，SLE)外周血CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞（Treg細(xì)胞）數(shù)量，相關(guān)細(xì)胞因子mRNA及蛋白表達(dá)水平的影響，探討TGP治療SLE的作用機(jī)制。
　　 方法:免疫磁珠法分離病例組

2、及對照組外周血CD4+T細(xì)胞，使用空白、低、中、高濃度(0，62.5，312.5，1562.5μg/ml)TGP刺激培養(yǎng)后，流式細(xì)胞術(shù)檢測Treg細(xì)胞數(shù)量，提取總RNA，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-timePCR)檢測細(xì)胞因子mRNA表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測病例高濃度組培養(yǎng)液上清中細(xì)胞因子TGF-β1，IL-2及IFN-γ水平。
　　 結(jié)果:1.高濃度TGP干預(yù)SLE組Treg細(xì)胞數(shù)量較空白對照組顯著上調(diào)(p＜

3、0.01)，中、低濃度組無顯著差異(p＞0.05);健康對照各濃度組間無顯著差異(p＞0.05)。
　　 2.高濃度TGP干預(yù)SLE組IL-2及IFN-γmRNA(p＜0.01，p＜0.05)及蛋白(p＜0.01)表達(dá)較空白對照組顯著上調(diào)，而低、中濃度組無顯著改變(p＞0.05)，TGF-β1的mRNA水平各濃度組較空白對照組無顯著差異(p＞0.05）;健康對照各濃度組mRNA水平較空白對照組均無顯著差異(p＞0.05）。

4、>　　 結(jié)論:TGP通過上調(diào)細(xì)胞因子IFN-γ及IL-2誘導(dǎo)生成Treg細(xì)胞，可能為其有效治療SLE的機(jī)制之一。
　　 第二部分TGP對系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者CD4+T細(xì)胞Foxp3表達(dá)的影響及機(jī)制
　　 目的:研究TGP對Foxp3mRNA及蛋白表達(dá)及Foxp3基因啟動子區(qū)域甲基化水平的調(diào)控，從而探討TGP治療SLE的表觀遺傳機(jī)制。
　　 方法:免疫磁珠法分離SLE組及對照組外周血CD4+T細(xì)胞，使用空白、低、中

5、、高濃度(0，62.5，312.5，1562.5μg/ml)TGP刺激培養(yǎng)后，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-timePCR)檢測Foxp3mRNA表達(dá)，Western-blotting檢測Foxp3基因蛋白表達(dá)，重亞硫酸鹽測序(BSP)檢測Foxp3基因啟動子區(qū)域甲基化水平。
　　 結(jié)果:1.高濃度TGP干預(yù)SLE組Foxp3mRNA表達(dá)較空白對照組顯著上調(diào)(p＜0.01)，且干預(yù)48小時(shí)效果最明顯(p＜0.01），而低(62

6、.5μg/ml)、中(312.5μg/ml)濃度組反而下降(p＜0.01)
　　 2.高濃度TGP干預(yù)SLE組Foxp3蛋白表達(dá)較空白對照組明顯增加(p＜0.01)，低、中濃度組無顯著改變(p＞0.05）
　　 3.SLE空白對照組Foxp3基因啟動子區(qū)域CpGs(-18，-33，-40，-52，-88，-101，-113and-139bp)相對健康空白對照組處于高甲基化水平，SLE三個(gè)濃度組甲基化水平均下調(diào)(p＜0.0