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文檔簡介
1、目的:
通過檢測系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者CD4+T細胞microRNA(miRNA)表達水平,為揭示miRNA在SLE發(fā)生、發(fā)展中的作用奠定基礎。
方法:
1.密度梯度離心分離正常人、SLE患者的外周血單個核細胞,磁珠分離CD4+T細胞;
2.試劑盒提取miRNA和總蛋白;
3.miRNA微陣列芯片(mic
2、roarry)高通量檢測miRNA在正常人和患者的CD4+T細胞的表達水平;
4.莖環(huán)狀引物實時定量聚合酶鏈反應(Stem-loop quantitativereal-time PCR,Stem-loop RT-PCR)檢測miRNA的表達水平;
5.蛋白質印跡(Western blot)檢測蛋白表達水平。
結果:
1.芯片結果顯示:與正常對照組相比,SLE患者CD4+T細胞中mi
3、R-126,miR-1246,miR-1308,miR-574-5p,miR-638,miR-7顯著上調(P<0.01),miR-142-3p,miR-142-5p,miR-197,miR-186,miR-31顯著下調(P<0.01)。
2.Stem-loop RT-PCR驗證:與正常對照組相比,SLE患者CD4+T細胞中miR-126明顯上調(p<0.001),miR-142-3p明顯下調(p=0.001),miR-14
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