線類體通透轉換孔的分子身份及其與心肌細胞死亡的關系.pdf

1、背景：心血管疾病是人類疾病中致死致殘的主要因素之一，其病程中造成病理性損害的各種細胞死亡形式又都經(jīng)歷線粒體通透轉換孔(Mitochondrialpermeability transition pore，mPTP)的形成與開放。再灌注損傷(Reperfusion injury，RI)是眾多疾病中病理損害的主要機制。在缺血后再灌注的初期，線粒體內膜上形成大量的mPTP，導致線粒體基質腫脹、線粒體崩解，細胞色素c(cytochromec，Cy

2、t-c)等的釋放，繼而引發(fā)細胞死亡。然而mPTP的分子身分及其與心肌細胞死亡的關系卻尚不清楚。因此關于mPTP的研究具有重要的現(xiàn)實意義和社會意義。線粒體溶質運載體(solute carrier，SLC)家族的腺嘌呤核苷轉換體(adenosine nucleotide translocase，ANT)與磷運載體(phosphate carrier，PiC)被認為參與mPTP的形成與開放。我們假設mPTP由多種SLC成員構成，并在前期實驗中

3、發(fā)現(xiàn)PiC，ADP/ATP translocase2(ANT2)，ATP-Mg/Pi carriers(APC1/3)可能參與mPTP的形成與開放。
　　 目的：闡明mPTP的分子構成；揭示mPTP構成組分在細胞死亡中的作用。
　　 實驗方法：主體實驗采用大鼠心肌細胞系H9c2，利用魚藤酮建立細胞模擬缺血再灌注模型，以細胞壞死作為mPTP開放的標準。用siRNA(Small interferingRNAs)沉默PiC、A

4、NT2、APC1和APC3后進行模擬缺血再灌注處理，檢測細胞壞死狀況以驗證以上四個分子是否參與mPTP的形成與開放。利用Realtime-PCR技術比較正常細胞、抗再灌注損傷細胞及其傳代細胞中mPTP各構成組分的表達情況，最終確定mPTP的分子構成及其與心肌細胞死亡的關系。在缺血再灌注處理中加入mPTP構成組分的抑制劑環(huán)孢霉素A(Ciclosporin A，CsA)、米酵菌酸(bongkrekic acid，BK)、膠蒼術苷(carbo

5、xiatractilosyde，CAT)、單寧酸(tannic acid，TA)檢測其細胞保護作用。
　　 實驗結果：模擬缺血再灌能夠穩(wěn)定誘導mPTP的開放并最終導致大部分細胞發(fā)生壞死。沉默PiC、ANT2、APC1和APC3均能抑制mPTP的形成與開放，進而降低細胞的再灌注損傷。這些結果提示mPTP是多種SLC家族成員共同構成。比較正常細胞、抗再灌注損傷細胞及其傳代細胞中mPTP各構成成分的表達情況進一步發(fā)現(xiàn)：抗再灌注損傷細胞

6、中mPTP各構成組分表達下調，其傳代細胞mPTP各構成組分表達回調，同時失去心肌細胞保護作用，提示mPTP構成組分表達的下調是細胞抵抗再灌注損傷的主要原因。抑制劑Ciclosporin A(cyclophilin D)，bongkrekic acid(ANT)，carboxiatractilosyde(ANT)和tannicacid(APC1/3)在缺血再灌注處理中對細胞有保護作用。
　　 結論：mPTP由多種SLC家族成員共同