缺氧時心肌細胞自噬的變化及其機理的研究.pdf

1、目的：
　　通過對缺氧時H9C2心肌細胞自噬相關蛋白變化的觀察，證明自噬在缺氧時的變化和作用，以及HIF-1α可能與自噬有關。
　　方法：
　　1.分組：
　　1.1.正常對照組：選用正常高糖（10％）DMEM培養(yǎng)基，三十七攝氏度、5%二氧化碳孵箱培養(yǎng)。不做處置。
　　1.2.缺氧組：選用不含糖無血清培養(yǎng)基做缺氧處理，無任何藥物添加。
　　1.3.3-MA自噬抑制劑組：選用正常高糖（10%）DMEM培

2、養(yǎng)基，加入3-MA自噬抑制劑，三十七攝氏度、5%二氧化碳孵箱培養(yǎng)。
　　1.4缺氧+3-MA自噬抑制劑組：使用培養(yǎng)基為無糖無血清，抑制劑為3-MA自噬進行缺氧處理。
　　2.方法：通過Western Blot蛋白印記方法檢測細胞蛋白量表達。
　　通過MTT細胞增殖試劑盒檢測細胞增殖抑制率。
　　結果：
　　通過對比空白對照、缺氧、自噬抑制和缺氧加自噬抑制四組蛋白中Lc3、mTOR、Bcl-2/Bax、HIF

3、-1α蛋白量的比較，結果6h缺氧的情況下，自噬明顯變化。Lc3在缺氧后下降，6h變化最為明顯。mTOR對照組（1.0±0.04）vs缺氧組（2.30±0.20），P＜0.05，顯示mTOR在缺氧6h升高，與Lc3的結果一致。Bcl-2/Bax對照組（0.81±0.02）vs缺氧組（0.46±0.02），對照組（0.81±0.02）vs3-MA組（0.41±0.02），對照組（0.81±0.02）
　　vs缺氧+3-MA組（0.29

4、±0.20）,缺氧組（0.46±0.02）vs缺氧+3-MA組（0.29±0.20）,組間比較P＜0.05。MTT顯示缺氧后抑制率增加。顯示凋亡在缺氧，自噬抑制后凋亡進一步增加。HIF-1α對照組（1.04±0.06）vs缺氧組（1.52±0.02），對照組（1.04±0.06） vs缺氧+3-MA組（1.40±0.20），組間比較P＜0.05，顯示在缺氧后HIF-1α表達上升，缺氧組（1.52±0.02）vs缺氧+3-MA組（1.40

5、±0.20），組間比較沒有統(tǒng)計學意義，可以推斷HIF-1α位于3-MA作用位點上游。進一步在HIF-1α和自噬下降之間存在聯(lián)系。結果SPSS17.0軟件分析，組件兩兩比較P＜0.05，組間比較有統(tǒng)計學意義。認為實驗結果可證明HIF-1α參與了心肌細胞缺氧情況下自噬的變化。
　　結論：
　　1.LC3II/I于缺氧6h最為明顯，同時mTOR表達上升，證明缺氧時自噬下降。
　　2.Bcl-2/Bax于缺氧后6h比值下降，證