播娘蒿中幾個重要基因的克隆和表達(dá)分析.pdf

1、本研究旨在開發(fā)和利用具有特異品質(zhì)和抗性性狀的野生物種播娘蒿的優(yōu)異基因。主要結(jié)果如下：
　　 利用RACE-PCR的方法從播娘蒿中克隆到兩個油酸脫氫酶基因（DsFAD2和DsFAD6），它們是油酸轉(zhuǎn)化為亞油酸的關(guān)鍵酶。這兩個基因的全長cDNA分別編碼383和447個氨基酸。序列分析顯示，這兩個基因都具有三個典型的用以結(jié)合催化所需的兩個鐵離子的組氨酸Boxes，表明這兩個基因具有去飽和酶功能。DsFAD2和其它作物中的FAD2一樣在

2、N端沒有明顯的信號肽，但在C端發(fā)現(xiàn)有一富含芳香族氨基酸的信號肽，是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)修復(fù)信號。DsFAD6在N端發(fā)現(xiàn)有葉綠體信號肽，使之定位在葉綠體上。RT-PCR顯示：DsFAD2和DsFAD6呈組成型表達(dá)；在傷害脅迫下都受到誘導(dǎo)；在低溫脅迫下DsFAD2的轉(zhuǎn)錄水平幾乎不受影響，而DsFAD6的轉(zhuǎn)錄受到抑制。
　　 利用RACE-PCR的方法，從播娘蒿中克隆到三個亞油酸脫氫酶基因（DsFAD3、DsFAD7和DsFAD8），它們是亞油酸轉(zhuǎn)

3、化為亞麻酸的關(guān)鍵酶。RT-PCR顯示：DsFAD3和DsFAD7兩個基因都呈組成型表達(dá)，但在莖、葉和幼嫩角果中表達(dá)量較高；DsFAD8僅在莖、葉和幼嫩角果等光合組織中適量表達(dá)。在傷害脅迫下，DsFAD3、DsFAD7和DsFAD8都受誘導(dǎo)；在低溫脅迫下，DsFAD3和DsFAD7轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)，NDsFAD8轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。
　　 利用RACE-PCR，從播娘蒿中克隆到一個二?；视王；D(zhuǎn)移酶基因（DsDGAT），該基因編碼蛋白催化

4、二酰甘油和脂肪酸?；o酶A轉(zhuǎn)化為三酰甘油，在生物體各個組織油脂的形成中扮演著重要的作用。DsDGAT全長cDNA編碼524個氨基酸。編碼蛋白N端有一個細(xì)胞質(zhì)內(nèi)膜信號肽。RT-PCI濕示：DsDGAT基因呈組成型表達(dá)，在莖和幼嫩角果中表達(dá)量較高；在傷害和低溫脅迫下，都受誘導(dǎo)表達(dá)。
　　 對播娘蒿角果cDNA文庫中的克隆進(jìn)行測序，得到一全長基因，它與擬南芥中蛋白酶抑制劑基因同源性很高，因此將其命名為DsTI-2。該基因全長442bp

5、，編碼100個氨基酸。組織表達(dá)分析顯示：DsTI-2基因在播娘蒿根、花蕾、花和角果中表達(dá)，但在莖和葉中幾乎不表達(dá)。在傷害脅迫下該基因受到誘導(dǎo)。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將DsTI-2基因?qū)胍吧蜔煵荩@得了具卡那抗性煙草。PCR和RT-PCR檢測初步證實了該基因已整合進(jìn)煙草基因組，并能表達(dá)。蛋白酶抑制劑活性檢測表明，轉(zhuǎn)基因植株都對胰蛋白酶和糜蛋白酶有抑制作用，未轉(zhuǎn)化植株的抑制性低。室內(nèi)離體葉片飼蟲抗蟲性鑒定進(jìn)一步證明，轉(zhuǎn)基因植株對棉鈴蟲具有一