幾個植物果種皮特異表達基因的克隆.pdf

1、黃曲霉毒素污染嚴(yán)重影響花生品質(zhì)和損害消費者的身體健康,是花生生產(chǎn)、加工面臨的一個世界性難題.為了解決這一難題,我們提出了一個新穎的思路.通過克隆幾個植物種皮或果皮特異表達基因?qū)ふ移渖嫌螁幼釉?用于抗黃曲霉基因的載體構(gòu)建,通過轉(zhuǎn)化花生,使抗性基因只在果皮或種皮特異表達;或通過轉(zhuǎn)入能使果皮種皮結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的基因,增強果皮種皮本身抗黃曲霉侵染的能力.該實驗采用現(xiàn)代分子生物學(xué)實驗手段,通過已報道的花生(Arachis hypogaea L.

2、)種皮特異表達序列標(biāo)簽(ESTs)PSC11、大豆(Glycine max L)果皮特異表達的疏水蛋白基因HPS和擬南芥(Arabidopsis thaliana)種皮特異轉(zhuǎn)錄因子MYB61序列,分別設(shè)計相應(yīng)的引物,從相應(yīng)物種基因組DNA中克隆出來,為下一步獲得種皮或果皮特異表達啟動子和轉(zhuǎn)入改變果皮、種皮結(jié)構(gòu)基因打下基礎(chǔ).具體實驗結(jié)果如下:1.花生種皮特異表達序列標(biāo)簽PSC11的克隆:根據(jù)PSC11的前后端設(shè)計引物,采用PCR技術(shù)從花生

3、基因組DNA中擴增出一段約500bp的序列.根據(jù)序列比較該序列與已知序列有93％的同源性.并在NCBI上進行BLAST比較,發(fā)現(xiàn)它與擬南芥和大豆的類枯草桿菌蛋白基因有很大的同源性.花生基因組DNA經(jīng)HindⅢ單酶切后,經(jīng)凝膠電泳,經(jīng)轉(zhuǎn)膜與固定后,與經(jīng)Dig標(biāo)記過的PSC11探針進行southern雜交.結(jié)果發(fā)現(xiàn),雜交信號較清楚,條帶單一.2.大豆疏水蛋白基因(HPS)的克隆:根據(jù)已報道的大豆疏水蛋白基因DNA序列,設(shè)計了一對引物,從大豆