從中國(guó)乙型肝炎病毒耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)看當(dāng)前耐藥現(xiàn)狀.pdf

1、背景與目的乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球性的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題，是嚴(yán)重危害人類健康的重要傳染病之一。依托國(guó)家“十一五”傳染病重大專項(xiàng)，進(jìn)一步完善中國(guó) HBV耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)，從平臺(tái)對(duì)中國(guó)慢性乙型肝炎(乙肝)及乙肝后肝硬化患者核苷（酸）類藥物治療耐藥情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)和分析。
　　研究方法第一部分：采用網(wǎng)絡(luò)信息與生物信息技術(shù)，建立并初步完善中國(guó)乙肝病毒（HBV）耐藥網(wǎng)絡(luò)監(jiān)測(cè)平臺(tái)，分析當(dāng)前HBV逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)區(qū)耐藥相關(guān)基因突變的特點(diǎn)及耐藥

2、現(xiàn)狀。
　　第二部分：抽提HBV感染者外周血血清HBV DNA，PCR分三段擴(kuò)增HBV RT區(qū)后構(gòu)建片段化DNA文庫(kù)，分別采用454和Sanger測(cè)序法測(cè)定DNA序列。對(duì)結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行處理后利用生物信息學(xué)軟件進(jìn)行比較分析。
　　主要結(jié)果第一部分：建立了目前國(guó)內(nèi)覆蓋面最廣的大型 HBV基因多功能共享數(shù)據(jù)庫(kù)。截止2012年12月份為止，已對(duì)9998例乙肝患者進(jìn)行了基因耐藥檢測(cè)，其中基因型明確的患者有7551例，B基因型為2421例

3、，占32.06％（2421/7551），C基因型為5088例，占67.38%（5088/7551），D基因型患者為42例，占0.56%（42/7551）。在檢測(cè)到原發(fā)性耐藥相關(guān)位點(diǎn)突變及代償性突變5207例(5229/7551，68.96%）患者中，C基因型占3700例（3700/5088,72.72%），B基因型占1482例（1482/2421，61.21%），C基因型的構(gòu)成比明顯高于B基因型(P<0.001)；在原發(fā)性耐藥位點(diǎn)突變中

4、，主要耐藥突變（rtM204V/I，rtA181T/V，rtN236T）的檢出率為43.64%（3295/7551），其中 M204I、rtA181T(sW172*)和rtA181V突變常見于C基因型（P值均小于0.01），而N236T突變卻在 B基因型中多見(P<0.001)。在恩替卡韋繼發(fā)性耐藥突變的患者中，M204V比M204I更常見（P<0.001）。國(guó)內(nèi)部分地區(qū)或醫(yī)院抗病毒治療的核苷（酸）藥物應(yīng)用方案紛繁復(fù)雜，不夠規(guī)范，多藥耐

5、藥的構(gòu)成比高達(dá)1.73%（131/7551）。第二部分：在檢測(cè)的20例患者中，19例患者的454和Sanger測(cè)序序列結(jié)果完整，其中B基因型6例，占31.58%（6/19），C基因型13例，占68.42%（13/19）；對(duì)已報(bào)道的HBV RT區(qū)NA耐藥相關(guān)基因突變進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明454法可以測(cè)到所有 Sanger法所發(fā)現(xiàn)的基因變異，每個(gè)樣本檢測(cè)到的變異總數(shù)454法為11~36個(gè)，Sanger法為3~17個(gè)，Sanger測(cè)序檢測(cè)到的變異