柚皮素對K562-A02細胞P-gp的影響及其與NF-κB的關聯(lián)研究.pdf

1、背景:
　　柚皮素是一種來源豐富,具有良好生物活性的二氫黃酮類化合物。研究表明,柚皮素能明顯地抑制P-gp的活性,從而影響自身或其他藥物的代謝動力學行為甚至改變藥物效應;柚皮素亦能阻抑 NF-κB的表達及活性,從而影響靶基因及蛋白的表達,發(fā)揮抗炎、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用。但圍繞柚皮素對MDR1 mRNA及P-gp表達影響的研究卻鮮有報道,就柚皮素、MDR1 mRNA及P-gp、NF-κB三者間的關聯(lián)亦有待闡明?；贜F-κB是眾

2、多細胞信號通路中調控MDR1轉錄及P-gp表達的重要核轉錄因子之一,研究柚皮素對MDR1 mRNA、P-gp表達的影響及其與NF-κB間的關聯(lián),可為柚皮素對P-gp影響的分子生物學機制研究提供新思路。
　　目的:
　　建立及評價穩(wěn)定高表達MDR1 mRNA及P-gp的K562/A02細胞模型,在此基礎上,采用RT-PCR、Western-blot等技術手段研究柚皮素對MDR1基因轉錄、P-gp表達的影響及其與NF-κB間的關

3、聯(lián),初步探討柚皮素對P-gp影響的分子生物學機制。
　　方法:
　　1.規(guī)范化培養(yǎng)K562/A02細胞,以1μg/ml阿霉素維持細胞耐藥性,實驗前2周脫藥培養(yǎng),觀察細胞生長狀況,繪制細胞生長曲線。
　　2.采用MTT法檢測PDTC、阿霉素、柚皮素對K562/A02的細胞毒性作用,選取細胞存活率大于80％的條件進行后續(xù)實驗。
　　3.將不同濃度NF-κB特異性抑制劑PDTC和NF-κB促進劑阿霉素單獨或聯(lián)合作用于K

4、562/A02細胞模型48h后,采用RT-PCR、Western-blot等技術手段檢測MDR1 mRNA及P-gp表達水平的變化,評價K562/A02細胞模型MDR1 mRNA及P-gp的表達情況。
　　4.將不同濃度柚皮素單獨或聯(lián)合5μM阿霉素作用于K562/A02細胞模型48h后,采用RT-PCR、Western-blot等技術手段檢測MDR1 mRNA及P-gp表達水平的變化,評價柚皮素對K562/A02細胞MDR1 mR

5、NA及P-gp表達的影響。
　　5.將500μM柚皮素、25μM PDTC單獨或聯(lián)合5μM阿霉素作用于K562/A02細胞模型48h后,采用RT-PCR、Western-blot等技術手段檢測MDR1 mRNA及P-gp表達水平的變化,比較各組間的差異,探討柚皮素、MDR1 mRNA及P-gp、NF-κB三者間的關聯(lián)。
　　結果:
　　1.與空白組相比,5~100μM PDTC作用于K562/A02細胞48h后能明顯下

6、調其MDR1 mRNA及P-gp的表達(P<0.05),且抑制作用隨濃度的增加而增強。
　　2.與空白組相比,0.5~15μM阿霉素作用于K562/A02細胞48h后,0.5~15μM阿霉素能明顯上調其MDR1 mRNA的表達(P<0.05),1~15μM阿霉素能明顯上調其P-gp的表達(P<0.05),且促進作用隨濃度的增加而增強。
　　3.與陽性對照組(5μM阿霉素)相比,5~100μM PDTC與5μM阿霉素聯(lián)合作用于

7、K562/A02細胞48h后,25μM、50μM PDTC明顯下調其MDR1 mRNA的表達(P<0.05),5μM、25μM、50μM PDTC明顯下調其P-gp的表達(P<0.05),且抑制作用均隨PDTC濃度的增加而增強。
　　4.與空白組相比,25~500μM柚皮素作用于K562/A02細胞48h后,100~500μM柚皮素明顯下調其MDR1 mRNA的表達(P<0.05),50~500μM柚皮素明顯下調其P-gp的表達(

8、P<0.05),且抑制作用隨柚皮素濃度的增加而增強。
　　5.與陽性對照組(5μM阿霉素)相比,25~500μM柚皮素與5μM阿霉素聯(lián)合作用于K562/A02細胞48h后,250μM、500μM柚皮素明顯下調其MDR1 mRNA的表達(P<0.05),50~500μM柚皮素明顯下調其P-gp的表達(P<0.05),且抑制作用均隨濃度的增加而增強。
　　6.與25μM PDTC組相比,500μM柚皮素作用于K562/A02細胞

9、48h后,能同等程度抑制其MDR1 mRNA及P-gp的表達(P>0.05);與25μM PDTC與5μM阿霉素聯(lián)合作用組相比,500μM柚皮素與5μM阿霉素聯(lián)合作用于K562/A02細胞48h后,能同等程度抑制阿霉素誘導MDR1 mRNA及P-gp的表達(P>0.05)。
　　結論:
　　1.本研究建立的K562/A02細胞模型能穩(wěn)定特異性高表達MDR1 mRNA及P-gp,是研究藥物、MDR1 mRNA及P-gp、NF-