枸杞多糖通過抑制線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路對小鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide,LBP）對小鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用，并探討LBP對小鼠腦缺血損傷保護(hù)作用的可能作用機制。
　　方法：雄性ICR小鼠，連續(xù)灌胃給藥LBP(10、20和40mg/kg)、尼莫地平（4mg/kg）和生理鹽水7天后，采用線栓法制備小鼠大腦中動脈阻塞腦缺血損傷模型。腦缺血2小時再灌注24小時后，對小鼠神經(jīng)功能缺陷進(jìn)行評分，用TTC染色法測定小鼠腦梗死體積

2、，用HE染色方法觀察小鼠腦組織形態(tài)學(xué)變化。采用TUNEL染色法檢測小鼠缺血區(qū)腦組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)量，采用分光光度法測定小鼠缺血側(cè)腦組織Caspase-3蛋白的活性，采用免疫熒光和Western blot方法檢測小鼠損傷側(cè)腦組織內(nèi)Bax，Bcl-2，CytC，Caspase-3，Caspase-9和裂解PARP-1蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：與模型組比較，LBP(20和40mg/kg)組能顯著降低小鼠腦組織梗死率(P<0.05)和小

3、鼠神經(jīng)功能缺陷評分(P<0.05)；與模型組相比，LBP（10、20和40mg/kg）組可以不同程度改善小鼠腦缺血損傷后腦組織神經(jīng)元的異常形態(tài)變化，并能顯著降低小鼠缺血區(qū)腦組織內(nèi)凋亡神經(jīng)元數(shù)量(P<0.05)。腦缺血損傷再灌注24小時后，與假手術(shù)組相比，模型組小鼠缺血側(cè)腦組織內(nèi)Caspase-3蛋白的活性明顯升高（P<0.01），LBP(40mg/kg)治療組和尼莫地平陽性藥物組能明顯降低 Caspase-3蛋白在小鼠缺血腦組織內(nèi)的表達(dá)

4、(P<0.05)。免疫熒光實驗結(jié)果顯示，再灌注24小時后，模型組小鼠缺血側(cè)大腦皮層中Bax，CytC和Caspase-3蛋白的表達(dá)較假手術(shù)組明顯升高（P<0.01），而Bcl-2蛋白的表達(dá)顯著降低（P<0.01）。與模型組相比，LBP(40mg/kg)組和尼莫地平組可顯著降低Bax，CytC和Caspase-3蛋白在缺血區(qū)腦組織的表達(dá)（P<0.01）并能明顯升高Bcl-2蛋白的表達(dá)(P<0.05)。Western blot實驗結(jié)果顯示，

5、模型組小鼠腦缺血損傷再灌注24小時后，損傷區(qū)腦組織內(nèi)Bax，CytC，Caspase-3，Caspase-9和裂解PARP-1蛋白的表達(dá)較假手術(shù)組均明顯升高(P<0.01)，而Bcl-2蛋白的表達(dá)顯著減少(P<0.01)。與模型組相比，LBP40mg/kg劑量組和尼莫地平組均可顯著降低Bax，CytC，Caspase-3，Caspase-9和裂解PARP-1蛋白的表達(dá)(P<0.05)，并能明顯提高Bcl-2蛋白在小鼠缺血側(cè)腦組織中的表達(dá)