基于P38MAPK-P65NF-κB信號通路研究枸杞多糖對小鼠局灶性腦缺血損傷的保護作用.pdf

1、目的：觀察枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide,LBP）對小鼠局灶性腦缺血損傷的保護作用與P38MAPK/P65NF-κB信號通路的關系并探討其對學習記憶及運動協(xié)調缺陷的作用。
　　方法：1、觀察枸杞多糖對小鼠局灶性腦缺血損傷的保護作用
　?、俨捎肔onga法構建小鼠大腦左側中動脈阻塞局灶性腦缺血損傷模型；②采用TTC染色觀察枸杞多糖對腦梗死體積的影響；③激光散斑成像儀檢測枸杞多糖對腦缺血損

2、傷小鼠缺血側大腦皮層血流灌注量的影響；④腦電記錄議檢測枸杞多糖對腦缺血損傷小鼠缺血側大腦皮層總功率的影響；⑤尼氏染色、HE染色觀察枸杞多糖對腦缺血損傷小鼠缺血側腦組織病理結構變化的影響；⑥透射電子顯微鏡觀察枸杞多糖對腦缺血損傷小鼠缺血側腦組織超微結構變化的影響。
　　2、探討枸杞多糖對小鼠局灶性腦缺血損傷的保護作用與P38MAPK/P65NF-κB信號通路的關系
　　①免疫熒光法檢測枸杞多糖對腦缺血損傷小鼠缺血側腦組織中星形

3、膠質細胞、小膠質細胞活化的影響；②Western blot檢測枸杞多糖對腦缺血損傷小鼠缺血側腦組織中p-P38MAPK、p-P65NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10蛋白含量的影響；③RT-PCR法檢測枸杞多糖對腦缺血損傷小鼠缺血側腦組織中TNF-α、IL-1βmRNA含量的影響。
　　3、觀察枸杞多糖對腦缺血損傷小鼠學習記憶及運動協(xié)調缺陷的影響
　?、倮肕orris水迷宮實驗(Morris Water

4、 Mazetest)對腦缺血損傷小鼠學習記憶能力進行實驗。Morris水迷宮實驗包括定位航行試驗(Place navigation test,PNT)及空間探索試驗(Spatial probe test,SPT)。定位航行試驗：用時6天，每天從4個入水點各訓練1次。訓練中從4個入水點隨機選取一個，將小鼠面向池壁放入水中并記錄小鼠尋找并爬上平臺所需時間（逃避潛伏期）?？臻g探索試驗：第6天最后一次航行實驗完成后，撤除平臺，然后將小鼠面向池壁

5、放入平臺所在對面象限中，記錄小鼠在120秒內穿過原平臺所在象限的次數(shù)、在目標象限運動時間比和探索軌跡。②Bederson評分、轉棒實驗、握力實驗檢測枸杞多糖對腦缺血損傷小鼠運動協(xié)調障礙的影響。
　　結果：1、枸杞多糖對小鼠局灶性腦缺血損傷的保護作用
　　與模型組比較，枸杞多糖(20、40mg/kg)組可顯著增加缺血側大腦皮層血流灌注量(P<0.05)；枸杞多糖(20、40mg/kg)組與模型組比較，可顯著增加大腦皮層總功率(

6、P<0.05)；與模型組比較，枸杞多糖(20、40mg/kg)組能顯著減少腦組織梗死率(P<0.05)；與模型組比較，枸杞多糖（10、20、40mg/kg）組可以減輕缺血損傷后腦組織病理性變化和神經元超微結構改變。
　　2、枸杞多糖對小鼠局灶性腦缺血損傷的保護作用與P38MAPK/P65NF-κB信號通路的關系
　　免疫熒光實驗結果顯示，與模型組比較，枸杞多糖(40mg/kg)顯著降低小鼠缺血側腦組織中星形膠質細胞、小膠質細

7、胞的活化；對比模型組，枸杞多糖(40mg/kg)組可顯著降低p-P38MAPK、p-P65NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白含量在缺血區(qū)腦組織的表達（P<0.01）并能明顯升高IL-10蛋白的表達(P<0.05)；對比模型組，枸杞多糖(40mg/kg)能顯著抑制缺血腦組織中TNF-α、IL-1βmRNA表達（P<0.01）。
　　3、枸杞多糖對腦缺血損傷小鼠學習記憶及運動協(xié)調障礙的改善作用
　　對比模型組，枸杞

8、多糖(20、40mg/kg)組能顯著減少腦缺血損傷小鼠逃避潛伏期(P<0.05)、增加目標象限時間比(P<0.05)和穿越平臺次數(shù)(P<0.05)；枸杞多糖(20、40mg/kg)組與模型組比較，可顯著增加小鼠在轉棒上運動時間(P<0.05)；對比模型組，枸杞多糖(20、40mg/kg)組小鼠的握力評分和神經功能缺陷評分顯著降低(P<0.05)。
　　結論：1.枸杞多糖對小鼠局灶性腦缺血損傷具有保護作用。
　　2.枸杞多糖可