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文檔簡介
1、目的:觀察激活蛋白-2a(activator protein-2 alpha,aP-2a)對肺腺癌a549細胞株血管內(nèi)皮細胞生長因子(Vascular endothelial cellgrowth factor,VEGF)基因和蛋白表達的影響,以及順鉑干預(yù)下aP-2a調(diào)節(jié)a549細胞VEGF表達的變化,探討aP-2a在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用和機制。 方法:1、運用轉(zhuǎn)基因技術(shù),以不同濃度的ad-LacZ(10,30,50 MOI)轉(zhuǎn)
2、染a549細胞,用X-gal染色鑒定轉(zhuǎn)染效率; 2、用50 MOI,100MOI的ad.aP.2a轉(zhuǎn)染a549細胞24小時,采用免疫組化法及差異表達RT-PCR法檢測不同轉(zhuǎn)染濃度的a549細胞VEGF蛋白質(zhì)/基因的表達水平; 3、用10mg/1DDP分別聯(lián)合50 MOI,100 MOI的ad-aP-2a轉(zhuǎn)染a549細胞24小時,采用免疫組化法及差異表達RT-PCR法檢測DDP干預(yù)下不同轉(zhuǎn)染濃度的a549細胞VEGF蛋白質(zhì)
3、/基因的表達水平; 結(jié)果:1、用IOMOI,30MOI,50MOI的ad-LacZ分別轉(zhuǎn)染a549細胞24小時后,其轉(zhuǎn)染率分別為42.1﹪,76.8﹪,91.3﹪。選用50MOIad-LacZ的腺病毒介導(dǎo)的基因能進入90﹪的細胞內(nèi),符合實驗要求。 2、a549細胞在轉(zhuǎn)染不同濃度的ad-aP-2a 24小時后,VEGF蛋白質(zhì)及mRNa的表達水平較轉(zhuǎn)染前顯著增高,且隨轉(zhuǎn)染倍數(shù)增加而增強,呈劑量依賴性(P<0.05);
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