核轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白2α對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因-蛋白質(zhì)表達(dá)的影響及意義.pdf

1、目的：觀察激活蛋白-2a(activator protein-2 alpha，aP-2a)對(duì)肺腺癌a549細(xì)胞株血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial cellgrowth factor,VEGF)基因和蛋白表達(dá)的影響，以及順鉑干預(yù)下aP-2a調(diào)節(jié)a549細(xì)胞VEGF表達(dá)的變化，探討aP-2a在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用和機(jī)制。 方法：1、運(yùn)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，以不同濃度的ad-LacZ(10，30，50 MOI)轉(zhuǎn)

2、染a549細(xì)胞，用X-gal染色鑒定轉(zhuǎn)染效率； 2、用50 MOI，100MOI的ad.aP.2a轉(zhuǎn)染a549細(xì)胞24小時(shí)，采用免疫組化法及差異表達(dá)RT-PCR法檢測(cè)不同轉(zhuǎn)染濃度的a549細(xì)胞VEGF蛋白質(zhì)/基因的表達(dá)水平； 3、用10mg/1DDP分別聯(lián)合50 MOI，100 MOI的ad-aP-2a轉(zhuǎn)染a549細(xì)胞24小時(shí)，采用免疫組化法及差異表達(dá)RT-PCR法檢測(cè)DDP干預(yù)下不同轉(zhuǎn)染濃度的a549細(xì)胞VEGF蛋白質(zhì)

3、/基因的表達(dá)水平； 結(jié)果：1、用IOMOI，30MOI，50MOI的ad-LacZ分別轉(zhuǎn)染a549細(xì)胞24小時(shí)后，其轉(zhuǎn)染率分別為42.1﹪，76.8﹪，91.3﹪。選用50MOIad-LacZ的腺病毒介導(dǎo)的基因能進(jìn)入90﹪的細(xì)胞內(nèi)，符合實(shí)驗(yàn)要求。 2、a549細(xì)胞在轉(zhuǎn)染不同濃度的ad-aP-2a 24小時(shí)后，VEGF蛋白質(zhì)及mRNa的表達(dá)水平較轉(zhuǎn)染前顯著增高，且隨轉(zhuǎn)染倍數(shù)增加而增強(qiáng)，呈劑量依賴性(P<0.05)；