電針刺激足三里和腎俞穴對兔內(nèi)毒素性急性腎損傷的影響.pdf

1、目的：內(nèi)毒素性急性腎損傷（acute kidney injury，AKI）被認為是預測危重癥患者病情發(fā)生發(fā)展及預后的獨立危險因素。研究表明，電針刺(electro-acupuncture，EA)可減輕內(nèi)毒素引起的臟器損傷程度，但具體機制尚不清楚。本研究擬通過電針刺激足三里和腎俞穴來探討電針刺對內(nèi)毒素性AKI腎臟的保護作用及其與腎臟HO-1表達的關系。
　　 方法：健康雄性新西蘭大白兔60只，2月齡，體重1.5-2.0kg，采用隨

2、機數(shù)字表法將其隨機分為6組(n=10):對照(C)組、血紅素氧合酶-1（HO-1）抑制劑鋅原卟啉-Ⅸ(ZnPP-Ⅸ)(Z)組、內(nèi)毒素性急性腎損傷(AKI)組、電針刺激穴位+AKI(EA)組、電針刺激非穴位+AKI(SEA)組、電針刺激穴位+AKI+ZnPP-Ⅸ(EAZ)組。所有動物以20％烏拉坦(1.5g/kg)腹腔注射麻醉后氣管切開插管，保持自主呼吸。右側頸內(nèi)動脈置管監(jiān)測動脈壓，耳緣靜脈給予脂多糖(lipopolysaccharide

3、，LPS)5mg/kg建立兔內(nèi)毒素性AKI模型。給予LPS后2h血壓下降至基線值的75％及以下為內(nèi)毒素性AKI模型制備成功的標準。 EA組和EAZ組電針刺激雙側足三里和腎俞穴，疏密波，頻率15Hz，刺激強度以兔出現(xiàn)輕微肌顫為宜，1次/d，15min/次，連續(xù)5天;SEA組刺激足三里和腎俞穴旁開0.5cm處;手術當天常規(guī)麻醉后持續(xù)給予電針刺激;AKI、EA、SEA、EAZ組耳緣靜脈注射LPS5mg/kg，C和Z組給予等容量生理鹽水0.5m

4、l。Z和EAZ組給予LPS后2h腹腔注射ZnPP-Ⅸ10μmol/kg，其它4組給予等容量NaHCO31ml。注射LPS后6h經(jīng)心臟取血，經(jīng)膀胱取尿液，全自動生化分析儀測定血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和尿α1微球蛋白(α1-MG)濃度;ELISA法測定血清致炎因子TNF-α和抑炎因子IL-10濃度;放血處死兔取腎臟，采用蘇木素伊紅(HE)染色法，電鏡下觀察腎組織病理學改變并評分(HSK); TUNEL法檢測腎組織細胞凋亡情況，計算

5、細胞凋亡指數(shù)(AI);硫代巴比妥酸法測定腎組織丙二醛(MDA)含量、黃嘌呤氧化酶法測定腎組織超氧化物岐化酶(SOD)活性;Western blot法檢測腎組織HO-1蛋白的表達、RT-PCR法檢測腎組織HO-1mRNA基因的表達情況。
　　 結果：與C組比較，AKI、EA、SEA和EAZ組血清BUN、Cr、TNF-α、IL-10、尿α1-MG濃度、HSK評分、AI、MDA含量均升高，SOD活性降低，HO-1蛋白、HO-1mRNA

6、基因的表達均上調(diào)(P＜0.05)，Z組上述各項指標差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);與AKI組比較，EA組血清BUN、Cr、TNF-α、尿α1-MG濃度、HSK評分、AI、MDA含量均降低，血清IL-10濃度、SOD活性升高，HO-1蛋白、HO-1mRNA基因的表達均上調(diào)(P＜0.05)，SEA和EAZ組上述各項指標差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);與EA組比較，SEA和EAZ組血清BUN、Cr、TNF-α、尿α1-MG濃度、HSK評分