暢郁逍遙散對腦卒中后抑郁(PSD)小鼠作用機理的實驗研究.pdf

1、腦卒中后抑郁(Post-stroke depression，PSD)是指腦卒中后并發(fā)的抑郁，為最常見的腦血管病并發(fā)癥。以腦卒中發(fā)生后出現(xiàn)的情緒低落、興趣減退、易疲勞、思維遲緩、食欲減退、悲觀絕望，甚則出現(xiàn)自殺企圖和行為異常等為主要臨床表現(xiàn)。目前對PSD發(fā)病機制的認識尚未統(tǒng)一，越來越多的學(xué)者認為PSD的發(fā)病機制是建立在腦卒中基礎(chǔ)上的、多因素介導(dǎo)的神經(jīng)生物學(xué)機制和社會心理學(xué)機制共同參與的結(jié)果。
　　 PSD藥物治療，主要是5-HT再

2、攝取抑制劑(SSRI)、三環(huán)類藥物(TCA)、NE再攝取抑制劑、單胺氧化酶抑制劑等，但都不同程度存在著選擇性強、耐受性差、價格昂貴等缺點，難以達到滿意療效。PSD多為老年人，耐受性較差，治療更要遵循療效確切、起效快、低副作用的原則。中醫(yī)藥治療精神情志疾患傳統(tǒng)悠久，且具有多方位、多靶點效應(yīng)、整體調(diào)節(jié)和毒副作用小的優(yōu)勢。中醫(yī)辨證論治，既能治療原發(fā)病中風(fēng)，也能改善中風(fēng)后的抑郁狀態(tài)，二者兼顧，使其在本病的防治方面顯示了良好的療效。
　　

3、 導(dǎo)師董夢久教授結(jié)合自己多年從事中西醫(yī)結(jié)合防治腦病的臨床經(jīng)驗，認為腦卒中后抑郁的病機特點主要為肝氣郁滯、痰瘀互結(jié)、元神失用。治療以逍遙散為基本方，酌加川芎、石菖蒲、郁金、葛根等，組成新方暢郁逍遙散，具有暢郁舒肝、化瘀滌痰、醒神開竅功效，體現(xiàn)了辨證與辨病相結(jié)合，臨床研究中顯示了對輕中度腦卒中后抑郁患者有較好療效。本課題擬從動物實驗角度研究暢郁逍遙散對小鼠行為學(xué)、神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)營養(yǎng)因子、基因等方面的影響，探討腦卒中后抑郁的發(fā)病機制及中醫(yī)藥抗

4、抑郁作用的機理，為PSD的臨床治療提供理論依據(jù)和參考。
　　 實驗一為暢郁逍遙散對PSD小鼠其行為學(xué)的影響。在本實驗過程中，復(fù)合處理制備腦卒中后抑郁小鼠模型，即采用雙側(cè)頸總動脈線栓再灌注法制備腦缺血小鼠模型，并在此基礎(chǔ)上，給予孤養(yǎng)和慢性不可預(yù)知的溫和應(yīng)激法聯(lián)合制備PSD模型。以腦缺血為內(nèi)在病理變化，以慢性不可預(yù)測性長期溫和的應(yīng)激和孤養(yǎng)為外在因素，最大限度的模擬人類卒中后抑郁發(fā)生的各種內(nèi)外因素，使之符合腦卒中后抑郁臨床發(fā)病特點。行

5、為學(xué)研究中觀測到，造模各組小鼠術(shù)后1～2周均開始出現(xiàn)明顯抑郁癥狀，表現(xiàn)為興趣快感缺乏、蜷縮不動，易絕望，易激惹，體重明顯減輕。糖水消耗量等實驗也證明了造模的成功。實驗發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方暢郁逍遙散各劑量能夠明顯改善PSD小鼠的抑郁癥狀，增加PSD小鼠體重，增加小鼠糖水消耗量，縮短PSD小鼠游泳不動時間及懸尾不動時間。效果與百優(yōu)解接近(強迫游泳懸尾實驗)，某些指標(biāo)上甚至表現(xiàn)更為優(yōu)越(體重和糖水消耗實驗)。
　　 實驗二為單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-

6、HT、NE、DA的測試，旨在探討PSD小鼠模型腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的變化，并觀察暢郁逍遙散對PSD模型小鼠腦內(nèi)單胺遞小鼠影響。動物處理及模型制備同實驗一，行為學(xué)實驗結(jié)束后，將各組小鼠斷頭取腦，冰臺上分離出額葉皮層、海馬，放入-80℃冰箱保存，采用熒光分光光度法檢測小鼠額葉皮質(zhì)和小鼠的單胺類遞質(zhì)的含量。結(jié)果造模各組單胺類遞質(zhì)均較正常組急劇減少，提示我們單胺類遞質(zhì)5-HT、NE、DA等的含量明顯減少與腦卒中后抑郁的發(fā)生有很大關(guān)系。同時，中藥復(fù)

7、方暢郁逍遙散可以顯著提高PSD小鼠腦內(nèi)NE、5-HT、DA等單胺類遞質(zhì)水平質(zhì)，尤其是對PSD小鼠海馬部位的NE和DA含量影響更為明顯，甚至超出正常組水平，提示我們這可能是中藥暢郁散暢郁逍遙散治療腦卒中后抑郁患者臨床產(chǎn)生療效的機理之一。
　　 實驗三為暢郁逍遙散對卒中后抑郁小鼠BDNF、GFAP等神經(jīng)營養(yǎng)因子的影響。動物處理及模型制備同實驗一，將PSD小鼠模型在實驗完成時進行水合氯醛、多聚甲醛心臟灌注并固定，用常規(guī)梯度酒精脫水及二

8、甲苯透明后，浸蠟，進行石蠟包埋，備石蠟切片進行HE、免疫組化及原位雜交檢測。實驗發(fā)現(xiàn)，PSD小鼠存在明顯的BDNF、GFAP等神經(jīng)營養(yǎng)因子表達下降，經(jīng)抗抑郁藥物干預(yù)后表達明顯增強，進一步證實了腦卒中后抑郁的發(fā)病與BDNF、GFAP等神經(jīng)營養(yǎng)因子表達有著密切關(guān)系。中藥復(fù)方暢郁散臨床抗抑郁作用機理可能與是通過增強腦卒中后抑郁患者腦額葉皮質(zhì)、海馬等多部位BDNF、GFAP等神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達，
　　 實驗四為暢郁逍遙散對PSD小鼠c-

9、fos、TH基因表達的影響。動物模型制備同實驗一，樣品制備同實驗二。實驗中發(fā)現(xiàn)，PSD小鼠存在明顯c-fos表達的增高，TH表達水平的降低，經(jīng)抗抑郁藥物干預(yù)后，c-fos表達下調(diào)而TH表達水平則表現(xiàn)出明顯上調(diào)，提示腦卒中后抑郁的發(fā)生與c-fos、TH等基因表達水平有很大關(guān)系。中藥復(fù)方暢郁散能夠迅速抑制c-fos表達，增強TH基因的表達，并且中藥兩個劑量組TH表達水平均接近或超過了正常組，提示我們中藥抗抑郁作用可能與影響c-fos、TH基