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1、背景與目的:順鉑作為肺癌的基礎(chǔ)化療藥物,順鉑耐藥是導(dǎo)致肺癌患者化療失敗的重要原因。本實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)P型銅轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶(Copper-transporting P-type adenosine triphosphatase,ATP7B)在肺腺癌細(xì)胞A549不同水平耐藥株中的表達(dá),以評(píng)估ATP7B與A549細(xì)胞順鉑耐藥的關(guān)系[1]。
方法:采用逐步增加順鉑劑量的方法,誘導(dǎo)出三株不同水平耐順鉑A549細(xì)胞株A549/DDP0.5、
2、A549/DDP1.0、A549/DDP2.0,MTT方法檢測(cè)各組別細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性,應(yīng)用RT-PCR及Westen blot方法分別檢測(cè)各組別細(xì)胞的ATP7B的mRNA及蛋白表達(dá)水平,分析A549細(xì)胞順鉑敏感性與ATP7B表達(dá)水平的關(guān)系[1]。
結(jié)果:相對(duì)于親本A549細(xì)胞,三組耐藥細(xì)胞的順鉑耐藥指數(shù)分別達(dá)到了1.7、3.2、5.2(P<0.001),與此相對(duì)應(yīng)ATP7B的mRNA表達(dá)水平分別達(dá)到了親本A549細(xì)胞的1.
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