STAT6基因RNAi表達(dá)載體的構(gòu)建及其沉默效應(yīng)觀察.pdf

1、哮喘是以氣道高反應(yīng)性和慢性氣道炎癥為特征的變態(tài)反應(yīng)疾病。Th1/Th2平衡失調(diào),即Th1功能下降,Th2功能亢進(jìn)是目前比較公認(rèn)的哮喘免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制。由于特異性調(diào)控Th0細(xì)胞向Th2分化,STAT6基因成為治療哮喘的靶基因。目前尚未報道STAT6基因的高效特異性的SiRNA序列,因此本研究選擇STAT6基因作為RNA干擾(RNAinterference,RNAi)的靶點,構(gòu)建STAT6干擾質(zhì)粒,為哮喘的治療研究提供新思路。
　　

2、目的:構(gòu)建針對STAT6基因的干擾質(zhì)粒,并觀察其對STAT6蛋白表達(dá)的抑制效果。
　　 方法:通過體外轉(zhuǎn)錄合成shRNA,與pIRES2-EGFP-STAT6基因表達(dá)質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞,在熒光顯微鏡下觀察干擾效果,同時從蛋白水平對干擾質(zhì)粒的抑制效果進(jìn)行驗證。
　　 結(jié)果:將pIRES2-EGFP-STAT6重組載體轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞后,結(jié)果顯示STAT6蛋白可以在細(xì)胞中高水平表達(dá)。與正常對照組相比,pGenesil3