游離膽固醇通過UPR-CHOP-MAPK途徑誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡.pdf

1、第一部分離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 目的:巨噬細(xì)胞凋亡與動(dòng)脈粥樣斑塊的破裂相關(guān)。游離膽固醇誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路是巨噬細(xì)胞凋亡的重要原因之一，但是其信號(hào)傳導(dǎo)途徑目前尚小清楚，木研究使用游離膽固醇誘導(dǎo)的細(xì)胞模型來對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探討。 方法:小鼠腹腔巨噬細(xì)胞在游離膽固醇聚集條件下，分別再加上特異性膽固醇移動(dòng)抑制劑U18666A、抗GADD153抗體、JNK特異性抑制劑SP600125,p38MAPK特異性抑制劑SB203580和ERK特異性抑制

2、劑PD098059分綱組孵育指定時(shí)間后對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。 結(jié)果:結(jié)果表明游離膽固醇聚集到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)后經(jīng)IRElα。激活未折疊蛋白反應(yīng)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡，p-38MAPK和JNK參與這一信號(hào)過程，而JNK不依賴于未折疊蛋白反應(yīng)途徑。 結(jié)論:過多的游離膽固醇聚集引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的重要原因之一，IRElα，p3 8-CHOP和JNK信號(hào)途徑參與這一過程。 第二部分動(dòng)物活體研究 目的:通過高膽固醇血癥誘發(fā)

3、的小鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型，對(duì)游離膽固醇誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的信號(hào)途徑進(jìn)行研究。 方法:C57BL6/J背景野生型和apoE基因缺陷小鼠各6只，分別使用普通飼料和高脂飼料分別喂養(yǎng)，13周后對(duì)兩組動(dòng)物的血脂、主動(dòng)脈血管進(jìn)行分析，并比較兩組動(dòng)脈組織中IRElα，CHOP，MAPKs的蛋白表達(dá)。 結(jié)果:高脂飼料喂養(yǎng)的apoE基因缺陷小鼠血脂水平顯著高于對(duì)照組，尤以膽固醇的升高最為明顯，并形成了嚴(yán)重的動(dòng)脈粥樣硬化:TUNEL染色顯示動(dòng)脈