兔ADSCs與人HaCaT細胞體外共培養(yǎng)誘導成ESCs的研究.pdf

1、研究目的： 應用共培養(yǎng)方法體外誘導脂肪來源干細胞（ADSCs）向表皮干細胞（ESCs）分化，探討其作為組織工程化皮膚種子細胞的可行性。 研究方法： 1.選用兔齡3～4月大白兔，用貼壁法及Ⅰ型膠原酶法從脂肪組織中分離出細胞，進行體外長期傳代及大量增殖培養(yǎng)，并觀察及檢測其生物學特性，以鑒定所培養(yǎng)細胞為脂肪來源干細胞（ADSCs）。 2.復蘇人HaCaT細胞株，并體外擴增培養(yǎng)。 3.實驗分組：①共培養(yǎng)3

2、天的ADSCs；②共培養(yǎng)7天的ADSCs；③第三代ADSCs。采用插入式細胞培養(yǎng)器（Transwell）與六孔板來構(gòu)建體外共培養(yǎng)模型，將HaCaT細胞和ADSCs分別種于上室和下室內(nèi)進行共培養(yǎng)。對共培養(yǎng)后的ADSCs進行形態(tài)學觀察鑒定，對3組細胞進行角蛋白K19，Pan-CK和β1整合素三個指標的免疫細胞學檢測，并用SPSS15.0進行統(tǒng)計學分析。 研究結(jié)果： 1.ADSCs生物學特性：①原代及傳代的兔ADSCs均呈長梭

3、形或三角形貼壁生長，形態(tài)與骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）相似。②傳代的兔ADSCs生長曲線呈“S”形，群體倍增時間為22h～25h。③免疫細胞化學檢測CD29， CD44表達陽性；而CD34， CD45表達陰性。 2.共培養(yǎng)后的ADSCs：①在形態(tài)上，共培養(yǎng)后的ADSCs細胞體積變大，橫徑變粗，由原來的細長梭型變成粗長梭型或短棒狀，形態(tài)向表皮細胞系轉(zhuǎn)化，并處于未成熟期；②在免疫細胞化學檢測中，共培養(yǎng)后的ADSCs均表達角蛋白K1

4、9， Pan-CK和β1整合素陽性，共培養(yǎng)7天的較共培養(yǎng)3天的ADSCs表達抗體陽性率增高，且具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)果表明共培養(yǎng)后的ADSCs為第三代ADSCs、表皮干細胞（ESCs）和暫時增殖細胞（TA細胞）的混合體。 研究結(jié)論： 1.膠原酶消化法可以獲得純度較高的ADSCs。 2.兔ADSCs與人HaCaT細胞體外共培養(yǎng)，可誘導向ESCs分化。 3.用Transwell體外構(gòu)建HaCaT與