反義Twist轉(zhuǎn)錄因子對上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)型的調(diào)控及抑制胃癌轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、上皮--間充質(zhì)轉(zhuǎn)型(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是多細(xì)胞生物胚胎發(fā)育早期最重要的事件之一。作為一個基本的生理現(xiàn)象，EMT在胚胎發(fā)育、慢性疾病的纖維化過程中都起著重要的作用。然而直到最近，隨著研究的深入，人們逐漸認(rèn)識到，上皮--間充質(zhì)轉(zhuǎn)型這個胚胎發(fā)育期間的基本生理學(xué)進(jìn)程可能同樣也參與了上皮源性腫瘤的發(fā)生及發(fā)展，尤其在癌的侵襲和轉(zhuǎn)移方面。因此，對EMT在腫瘤形成和侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其調(diào)控機(jī)制的

2、研究正越來越受到人們的關(guān)注。作為一種EMT的誘導(dǎo)因子，Twist不僅在正常發(fā)育中起著重要作用，其在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中也有著與其它已知的癌基因--樣的生物學(xué)效應(yīng)。目前，有關(guān)Twist在胃癌方面的研究幾乎是一片空白。因此，我們以低分化胃癌細(xì)胞株MKN45為研究對象，采用攜帶了反義Twist轉(zhuǎn)錄因子的質(zhì)粒對其進(jìn)行轉(zhuǎn)染，就Twist對MKN45細(xì)胞上皮一間充質(zhì)轉(zhuǎn)型的影響及其在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移過程中的作用和機(jī)制進(jìn)行了研究。 方法： 采用

3、免疫組織化學(xué)法研究臨床胃癌標(biāo)本中Twist的表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性，并且進(jìn)一步以低分化胃癌細(xì)胞株MKN45為研究對象，采用攜帶了反義Twist轉(zhuǎn)錄因子的質(zhì)粒對其進(jìn)行轉(zhuǎn)染，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析、Real-Time PCR、Western：Blot以及Transwell小室等分子生物學(xué)技術(shù)和方法，深入研究了Twist對MKN45細(xì)胞上皮--間充質(zhì)轉(zhuǎn)型相關(guān)基因表達(dá)的影響及其在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移過程中的作用和機(jī)制。 結(jié)果： Tws

4、it在43例胃癌患者癌組織標(biāo)本中的陽性表達(dá)率(58.14％)明顯高于Twsit在12例正常組織中的陽性表達(dá)率(25％)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示二者存在顯著性差異(P<0.05)。并且，Twist的高表達(dá)與胃癌患者是否存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Twist在胃癌MKN45細(xì)胞中亦呈高表達(dá)，免疫熒光激光共聚焦顯示Twist在MKN45細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)以胞質(zhì)為主，胞核僅見少量弱表達(dá)。反義Twist干擾影響了MKN45細(xì)胞的細(xì)胞周期、顯著抑制了增殖并增加了細(xì)

5、胞的凋亡。EMT相關(guān)基因的表達(dá)亦出現(xiàn)了相應(yīng)的變化：間充質(zhì)標(biāo)志物Fibronectin的mRNA和蛋白表達(dá)水平降低，MMP-9的表達(dá)被明顯的抑制，上皮性標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)顯著增加。不僅如此，這些基因和蛋白水平的改變也同時導(dǎo)致了MKN45細(xì)胞異質(zhì)粘附能力、遷移能力以及侵襲能力的降低。 結(jié)論： 核轉(zhuǎn)錄因子Twist可促進(jìn)胃癌發(fā)生轉(zhuǎn)移，反義Twist干擾可誘導(dǎo)胃癌MKN45細(xì)胞間充質(zhì)--上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)型的發(fā)生，并因此而