TIF1γ介導(dǎo)丙戊酸鈉抑制前列腺癌上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的機制研究.pdf

1、研究背景
　　前列腺癌是全球范圍內(nèi)男性第二大惡性腫瘤，我國前列腺癌的發(fā)病率近十年來逐年增長。在我國，超過40％的前列腺癌患者確診時已經(jīng)進入中晚期，遠遠高于歐美水平。雄激素剝奪治療(Androgen deprivation therapy，ADT)是國內(nèi)外晚期前列腺癌的主要治療方式，但其有效期一般僅能維持18-24個月。在ADT治療失效之后，疾病將發(fā)展為去勢抵抗性前列腺癌(Castrateresistant prostate can

2、cer，CRPC)，部分患者的腫瘤甚至進一步轉(zhuǎn)移至前列腺以外的其它器官。針對轉(zhuǎn)移性去勢抵抗性前列腺癌雖然可以選擇新型雄激素生物合成酶抑制劑治療，但作用有限。因此，尋求更多更有效的治療方法是目前研究的方向。
　　上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要的調(diào)控作用，在腫瘤細胞的EMT過程中，上皮細胞逐漸失去了本身的特性，侵入上皮基底膜并通過進入血液循環(huán)系

3、統(tǒng)獲得了浸潤周圍組織或遠處轉(zhuǎn)移的能力。除了失去胞間鏈接外，發(fā)生EMT的細胞逐漸失去了其細胞極性，上皮標記物諸如E鈣黏蛋白減少，而N鈣黏蛋白等間充質(zhì)細胞標記物逐漸增多，因此，具有此種特性的細胞更易向鄰近組織浸潤性生長或發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。腫瘤相關(guān)的EMT并不是單一的過程，腫瘤細胞除獲得了遷移和侵襲能力外，還具備了復(fù)雜且全面地參與表觀遺傳重組、新陳代謝和分化等能力。
　　在前列腺癌病人腫瘤進展過程中，EMT在前列腺癌由原位細胞向轉(zhuǎn)移性細胞的

4、轉(zhuǎn)化發(fā)展過程中起到了非常重要的作用，此類前列腺癌細胞失去了本身的上皮特性并獲得了間充質(zhì)細胞的特性。EMT同樣也促進了去勢抵抗性前列腺癌的發(fā)展過程。EMT過程受體內(nèi)多個信號通路的調(diào)節(jié)，其中轉(zhuǎn)化生長因子β(Transforming growth factorβ，TGF-β)信號通路起主要作用，SMAD4蛋白作為TGF-β信號通路信號傳遞過程中重要的載體蛋白，被認為是前列腺癌的促癌因子。E3泛素連接酶-轉(zhuǎn)錄中介因子1γ（Transcripti

5、onal intermediary factor1γ，TIF1γ）被認為通過單泛素化修飾SMAD4蛋白，促使其與磷酸化的SMAD3蛋白解離，參與了TGF-β/SMAD蛋白信號系統(tǒng)的調(diào)節(jié)過程。本課題組的前期相關(guān)研究顯示，丙戊酸鈉(Valproic acid，VPA)通過抑制SMAD4蛋白的表達逆轉(zhuǎn)了前列腺癌EMT過程。
　　在本課題中，我們收集了山東省立醫(yī)院泌尿微創(chuàng)中心2012年以來收治的20例受腹腔鏡前列腺癌根治術(shù)患者的前列腺癌組

6、織及癌旁組織，應(yīng)用免疫組化技術(shù)分析SMAD4及TIF1γ蛋白在前列腺癌患者與正常人之間的不同表達水平以及各蛋白與臨床病理變量的關(guān)系;體外實驗部分，我們運用了免疫組化、免疫共沉淀、免疫印跡等技術(shù)，證實了TIF1γ對SMAD4蛋白的單泛素化修飾作用是介導(dǎo)VPA抑制前列腺癌EMT過程的具體分子機制。
　　研究目的
　　1.應(yīng)用生物信息學(xué)分析前列腺癌相關(guān)蛋白在前列腺癌患者與正常人之間的不同表達水平以及各蛋白與臨床病理變量的關(guān)系。

7、r>　　2.制作20例前列腺癌組織及其癌旁組織標本的石蠟切片，應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測SMAD4及TIF1γ蛋白的表達情況。
　　3.體內(nèi)、外實驗部分，分別培養(yǎng)PC3細胞及LNCaP細胞，構(gòu)建荷瘤小鼠模型，并用VPA處理，檢測TIF1γ、SMAD4及EMT過程中相關(guān)標記蛋白在不同處理組的表達量，探討VPA抑制前列腺癌EMT過程的具體機制。
　　研究方法
　　1.應(yīng)用石蠟包埋切片技術(shù)處理臨床采集的20例前列腺癌患者的前列腺癌

8、組織及癌旁組織標本，應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測TIF1γ、SMAD4蛋白在不同組織標本中表達量的差異，結(jié)合患者隨訪資料，應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)方法分析目的蛋白在前列腺癌患者與正常人之間不同表達水平以及各蛋白與臨床病理變量的關(guān)系，探討目的蛋白的表達與患者預(yù)后的關(guān)系，以期尋找新的前列腺癌預(yù)后指標和潛在的治療靶點。
　　2.采用免疫印跡、免疫共沉淀及免疫組化等分子生物學(xué)技術(shù)檢測前列腺癌細胞及荷瘤小鼠瘤體在VPA處理組與對照組中相關(guān)蛋白的表達情況，探討VP

9、A調(diào)控 TIF1γ抑制前列腺癌細胞EMT過程及其與單泛素化SMAD4蛋白之間的關(guān)系。
　　研究結(jié)果
　　1.VPA升高了野生型PC3/LNCaP細胞內(nèi)單泛素化SMAD4蛋白水平，但無法影響SMAD4點突變的PC3/LNCaP細胞內(nèi)單泛素化SMAD4蛋白的水平。
　　2.VPA通過調(diào)控TIF1γ蛋白抑制前列腺癌細胞EMT過程。
　　3.VPA抑制了荷瘤小鼠瘤體的生長。
　　4.前列腺癌組織內(nèi)TIF1γ與SMA

10、D4蛋白含量呈負相關(guān)，免疫組化結(jié)果顯示前列腺癌組織內(nèi)TIF1γ含量明顯低于癌旁組織，SMAD4含量與上述結(jié)果相反。
　　5.體內(nèi)實驗結(jié)果顯示，相較于對照組，VPA處理組中TIF1γ表達量升高，而SMAD4蛋白表達量下降。
　　研究結(jié)論
　　VPA通過加速SMAD3/SMAD4復(fù)合物的核內(nèi)解離過程，降低核內(nèi)SMAD3/SMAD4復(fù)合物含量，從而抑制前列腺癌細胞EMT過程，TIF1γ對SMAD4的單泛素化修飾作用是VPA扣