轉(zhuǎn)錄因子FOXO4在胃癌增殖轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、胃癌是危害人類健康最嚴(yán)重的惡性腫瘤之一。目前,胃癌主要治療方法有手術(shù)治療、放化療及生物學(xué)治療等。手術(shù)與輔助治療的有效性主要是針對比較局限的原位癌,胃癌的致死性絕大部分歸因于腫瘤的轉(zhuǎn)移。因此,探索與胃癌的增殖轉(zhuǎn)移相關(guān)的關(guān)鍵分子及其對胃癌發(fā)展的作用機(jī)制或許可以幫助我們早期診斷并預(yù)測胃癌的進(jìn)展,從而降低胃癌的致死率。轉(zhuǎn)錄因子FOXO家族被認(rèn)為在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)錄因子FOXO4在轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中相對于原位

2、結(jié)腸癌組織表達(dá)降低。我們推測:FOXO4是否也參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展,它會不會成為胃癌發(fā)展的關(guān)鍵分子呢?若其與胃癌的發(fā)生相關(guān),其對胃癌具體作用機(jī)制又是怎樣的呢?因此,研究FOXO4在胃癌發(fā)生中的作用,并探索其具體作用機(jī)制,將有助于我們進(jìn)一步深入了解胃癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制。
　　目的:
　　1.研究FOXO4在胃癌組織及細(xì)胞系表型中的作用,探討FOXO4在胃癌及轉(zhuǎn)移的組織及細(xì)胞系中的表達(dá)變化;
　　2.構(gòu)建FOXO4過表達(dá)和低

3、表達(dá)的胃癌細(xì)胞亞系,研究FOXO4在體內(nèi)、體外對胃癌轉(zhuǎn)移的影響;
　　3.進(jìn)一步探索FOXO4對胃癌轉(zhuǎn)移的作用以及機(jī)制。
　　方法:
　　1.通過免疫組化、組織芯片、免疫印跡(Western blot)以及實(shí)時(shí)定量PCR分別驗(yàn)證FOXO4在相應(yīng)組織及細(xì)胞系水平的表達(dá)變化。
　　2.構(gòu)建FOXO4過表達(dá)慢病毒載體及其低表達(dá)寡核苷酸載體,并分別將其轉(zhuǎn)染入相應(yīng)的胃癌細(xì)胞系(SGC-7901和BGC-823)中,利用We

4、stern blot和RT-PCR來驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率。
　　3.通過細(xì)胞增殖MTT實(shí)驗(yàn)、平板克隆、劃痕實(shí)驗(yàn)以及高內(nèi)涵實(shí)時(shí)監(jiān)測對比分析FOXO4對胃癌細(xì)胞運(yùn)動的影響,從功能學(xué)水平驗(yàn)證FOXO4對胃癌增殖及轉(zhuǎn)移的影響。
　　4.通過裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)以及裸鼠尾靜脈注射 FOXO4過表達(dá)的胃癌細(xì)胞系與對照細(xì)胞系,并定期進(jìn)行裸鼠成像,體內(nèi)監(jiān)測FOXO4對胃癌增殖、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的影響。
　　5.通過生物信息學(xué)等方法預(yù)測 FOXO4對胃癌

5、可能的影響機(jī)制,利用 RT-PCR,western blot以及細(xì)胞免疫熒光進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果:
　　1.FOXO4在胃癌組織和細(xì)胞系相對于正常的胃黏膜表達(dá)下調(diào),且其在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中相對于原位癌也有顯著低表達(dá)(p<0.05)。
　　2.體外轉(zhuǎn)染FOXO4過表達(dá)的慢病毒后,可明顯增加親本胃癌細(xì)胞系SGC-7901中 FOXO4的表達(dá)量;轉(zhuǎn)染 FOXO4小干擾 RNA后可有效降低其在胃癌細(xì)胞系BGC-823中的

6、表達(dá)。
　　3.FOXO4過表達(dá)的胃癌細(xì)胞系7901-FOXO4其增殖及轉(zhuǎn)移能力明顯下降,而干擾 FOXO4表達(dá)后的胃癌細(xì)胞系 BGC-823-siFOXO4其增殖轉(zhuǎn)移能力相對較強(qiáng)(p<0.05)。
　　4.FOXO4過表達(dá)的胃癌細(xì)胞系7901-FOXO4其在裸鼠皮下成瘤能力相對于親本細(xì)胞SGC-7901較低,且其在裸鼠尾靜脈注射后遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力也相對較弱。
　　5.RT-PCR及細(xì)胞免疫熒光結(jié)果證實(shí):FOXO4過表達(dá)的