口腔黏膜間充質干細胞存在及在口腔扁平苔蘚中變化的初步研究.pdf

1、口腔扁平苔蘚(oral lichen planus,OLP)是一種常見的口腔黏膜病，其在口腔黏膜病中的發(fā)病率僅次于復發(fā)性口腔潰瘍（recurrent aphthous ulcer,RAU）。該疾病常常遷延不愈，給病人造成巨大痛苦。由于口腔扁平苔蘚病因不明，因此治療以對癥為主，經常使用免疫抑制劑，如糖皮質激素等。移植物抗宿主病（Graft-vs-host disease,GVHD)是同種異體骨髓移植（bone marrow transpl

2、antation,BMT)的一種常見的嚴重的并發(fā)癥?？谇火つ鹊腉VHD無論在臨床還是組織學上與OLP都非常相似。雖然兩者可能具有不同的抗原特異性，但是它們可能具有類似的免疫致病機理，同樣的引起T淋巴細胞的密集浸潤，基底細胞凋亡，上皮基底膜的破壞。因此通常認為關于其中一種疾病的病理生理學研究結果也能夠給另一種疾病以提示。間充質干細胞(mesenchymal stem cells,MSC)屬于成體干細胞，廣泛分布于人體各個組織，不同組織來

3、源的MSC具有異質性。MSC與胚胎干細胞相比避免了倫理學上的爭議，并且由于其低免疫原型，異體移植常不引起明顯的排斥反應，因此有著廣闊的應用前景。人們在MSC研究的初期主要寄希望于其在組織工程以及再生醫(yī)學等方面的應用，但實際上MSC第一次應用于臨床是利用其免疫調節(jié)能力治療GVHD，取得了較好的效果。MSC的免疫調節(jié)能力遂成為MSC研究的另一個熱點。產生了眾多的關于MSC治療免疫相關疾病的基礎和臨床實驗研究。在類風濕性關節(jié)炎、多發(fā)性硬化、移

4、植物排斥以及自身免疫性心肌炎等的臨床前實驗動物模型中，MSC都展示出了良好的治療效果。同時由于MSC具有免疫調節(jié)能力，其與機體的整體免疫平衡有關，其功能的異?？赡芘cOLP發(fā)病有關。
　　由于GVHD與OLP之間存在密切的聯(lián)系，我們猜測MSC同樣也可能用于治療OLP，并且口腔黏膜來源的MSC可能更具安全性。但是關于口腔黏膜是否存在MSC以及其生物學特性鮮見報道。MSC與OLP的發(fā)病是否相關也未見報道。
　　本實驗分為兩部分：<

5、br>　　1．口腔黏膜內間充質干細胞的鑒定
　　目的：證明口腔黏膜內存在MSC，并且對其進行分離培養(yǎng)及生物學特性的研究。
　　方法：利用大鼠為實驗動物，采用標記滯留細胞(label retaining cells,LRC)技術，利用BrdU為標記物，檢測大鼠口腔黏膜內可能存在的間充質干細胞；利用細胞貼壁法，分離培養(yǎng)人體正?？谇火つそM織內的MSC，應用波形絲蛋白抗體（vimentin）、stro-1單克隆抗體、CD146(Me

6、l-CAM)多克隆抗體、Oct3/4單克隆抗體、CD45單克隆抗體、Nestin單克隆抗體等檢測所分離細胞的表面抗原表達。在體外條件下利用成脂和成骨誘導方法，研究所分離細胞的多向分化能力。
　　結果：口腔黏膜內存在標記滯留細胞，利用細胞貼壁法能夠從口腔黏膜中分離出一類細胞，抗原表達符合MSC的特征，例如Stro-1（+），CD146（+），CD45(-),同時我們分離出的細胞還表達Nestin。在成骨和成脂的誘導下，我們所分離的細

7、胞具備向成骨細胞以及脂肪細胞分化的能力。
　　結論：口腔黏膜內存在間充質干細胞，并且可以通過傳統(tǒng)的細胞貼壁法進行分離及體外培養(yǎng)。同時口腔黏膜內的MSC與真皮中的MSC類似，可能具有向神經系統(tǒng)細胞分化的潛力。
　　2．MSC在OLP病變組織中的變化
　　目的：研究OLP組織內MSC的變化。
　　方法：利用MSC的相對特異性標志Stro-1，CD146，Oct4等抗體檢測OLP與正常組織內以上標志的表達改變。

8、　　結果：Stro-1在正常組織以及OLP病變組織中均有表達，在正常組織中散在分布，集中于小血管周圍。陽性細胞呈圓環(huán)狀排列，符合血管周細胞的排列方式。Stro-1在OLP病變組織中主要集中于上皮基底膜下區(qū)，并且陽性表現(xiàn)強于正常組織。CD146在正常組織及OLP病變組織中都有表達。在正常組織中散在分布，而在OLP病變組織中主要分布于黏膜下層，固有層很少見陽性細胞，幾乎全部為密集的淋巴細胞浸潤所占據。陽性區(qū)域的整體分布較為彌散。但是在個別上