細(xì)胞免疫和細(xì)胞凋亡在口腔扁平苔蘚發(fā)病中的作用與意義.pdf

1、（1）口腔扁平苔蘚(oral lichen planus，OLP)是臨床上最為常見(jiàn)的慢性非感染性口腔黏膜病，是一種發(fā)生在皮膚及黏膜的慢性炎癥性疾病。本研究通過(guò)對(duì)65例口腔扁平苔蘚患者病變組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查證實(shí)其主要病理特征為：上皮過(guò)度角化或角化不全，棘層增生多見(jiàn)。上皮形狀不規(guī)則，呈鋸齒狀?；准?xì)胞層液化、變性，導(dǎo)致基底層角質(zhì)細(xì)胞排列紊亂，基底膜界限不清，基底層角質(zhì)細(xì)胞液化壞死。固有層中有密集的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)帶，該浸潤(rùn)帶主要分布在固有層

2、的淺層，部分還可深入到固有層的深層或者粘膜下層。本研究65例口腔扁平苔蘚患者中有23例在上皮的棘層、基底層或粘膜固有層可見(jiàn)圓形或卵圓形膠樣小體，為均質(zhì)性、嗜酸性，可能是屬于凋亡的產(chǎn)物。5/65例出現(xiàn)上皮輕度不典型增生，表現(xiàn)為上皮細(xì)胞異乎于常態(tài)的增生，具體表現(xiàn)為增生的細(xì)胞大小不一，形態(tài)多樣，核大而濃染，核漿比例增大，核分裂可增多但通常呈正常核分裂像。細(xì)胞排列較亂，細(xì)胞層次增多，極向消失。
　?。?）應(yīng)用免疫組化S-ABC法檢測(cè)CD4

3、+、CD8+T細(xì)胞在35例口腔扁平苔蘚組織及10例正常口腔粘膜中的表達(dá)水平，結(jié)果表明：正常口腔粘膜上皮內(nèi)幾乎不表達(dá)CD4+、CD8+T細(xì)胞，僅基底層可見(jiàn)散在的CD4+、CD8+T細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)?？谇槐馄教μ\固有層顯示中等量或大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，92.3％（60/65）的病例出現(xiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。口腔扁平苔蘚組與對(duì)照組比較CD8+表達(dá)水平顯著升高（P<0.01）, CD4+與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（P>0.05），表明口腔扁平苔蘚的發(fā)生可能與病變

4、組織中細(xì)胞免疫改變有關(guān)?？谇槐馄教μ\組CD8+T細(xì)胞主要位于固有層淺層，接近基底膜破壞處表達(dá)，CD4+T細(xì)胞主要于固有層深層表達(dá)。CD4/CD8比值下降，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。
　?。?）應(yīng)用免疫組化S-ABC法檢測(cè)Bcl-2和Bax在口腔扁平苔蘚組及對(duì)照組中的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，Bcl-2主要表達(dá)于上皮基底層及棘層細(xì)胞的胞漿和胞膜，在正?？谇火つぶ校?/10例陽(yáng)性（+）表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率80%；在口腔扁平苔

5、蘚的上皮組織中，17/35例陰性表達(dá)，3/35例在基底層和棘層呈零星散在表達(dá)，15/35例淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)帶處陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)，陽(yáng)性表達(dá)率51.4%；Bcl-2在口腔扁平苔蘚中陽(yáng)性表達(dá)率與正常口腔黏膜比較無(wú)顯著性變化（P>0.05），但在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)帶處表達(dá)增強(qiáng)。35例口腔扁平苔蘚組織中，Bax陽(yáng)性表達(dá)27例，陽(yáng)性率77.1%，其中14例呈強(qiáng)陽(yáng)性(+++)表達(dá)，9例為中度陽(yáng)性(++)，4例弱陽(yáng)性(+)，陽(yáng)性細(xì)胞以基底層和棘層中下部最明顯。10例

6、正常人口腔黏膜中，3例弱陽(yáng)性(+)表達(dá)，其余病例均為陰性(-)，陽(yáng)性表達(dá)率為30.0%。Bax在口腔扁平苔蘚中陽(yáng)性表達(dá)率和表達(dá)強(qiáng)度與正常口腔黏膜比較明顯增高（P<0.01）。
　?。?）用 TUNEL法（原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法）檢測(cè)口腔扁平苔蘚患者病變組織及對(duì)照組中細(xì)胞凋亡的情況，結(jié)果表明，65例口腔扁平苔蘚病變組織口腔粘膜上皮層及固有層均可見(jiàn)凋亡細(xì)胞表達(dá)，核輪廓清楚、致密，呈棕褐色?？谇槐馄教μ\病變組織的上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯較正常

7、對(duì)照組高（P<0.01），凋亡細(xì)胞多位于基底層液化壞死處，表達(dá)率為85.7%（30/35）。而對(duì)照組中的凋亡細(xì)胞多位于表層、棘層及基底層，表達(dá)率為80%（8/10）。
　?。?）雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)外周血血清TNF-a和IFN-γ含量，結(jié)果表明口腔扁平苔蘚患者外周血血清 IFN-γ和 TNF-α含量均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。
　　（6）采用單克隆抗體花環(huán)法對(duì)T細(xì)胞亞群進(jìn)行識(shí)別與測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與健康組比較，2

8、0例口腔扁平苔蘚患者 CD8+顯著升高（P<0.05），CD4+與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（P>0.05），CD4+/CD8+與對(duì)照組比較顯著降低（P<0.01），和免疫組織化學(xué)染色分析結(jié)果一致。
　?。?）采用透射電鏡技術(shù)觀察發(fā)現(xiàn)口腔扁平苔蘚患者口腔黏膜棘層胞質(zhì)內(nèi)充滿張力原纖維，并變粗增多，排列紊亂，內(nèi)織網(wǎng)擴(kuò)張，內(nèi)含不定形物，線粒體腫大及峭消失，游離核糖體增多。多數(shù)細(xì)胞器減少，細(xì)胞核團(tuán)塊狀異染色質(zhì)增多，核周間隙加寬，有的核旁空泡，

9、細(xì)胞變形，橋粒結(jié)構(gòu)破壞，細(xì)胞間隙明顯擴(kuò)大?；准?xì)胞與基底膜半橋粒及細(xì)胞間橋粒破壞，部份細(xì)胞變形，排列紊亂，錯(cuò)位，水腫細(xì)胞間隙加大，空泡，變性，胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹，峭明顯減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張。細(xì)胞核增大，異染色質(zhì)增多，凋亡細(xì)胞增多。凋亡細(xì)胞出現(xiàn)頻率高于健康組。凋亡主要表現(xiàn)為染色質(zhì)沿核膜邊聚，且呈“C”形、新月形或團(tuán)塊狀，并可見(jiàn)凋亡小體。
　　結(jié)論：
　　1．口腔扁平苔蘚的病理組織學(xué)特征為基底層角質(zhì)形成細(xì)胞的損傷，不同程度的變性、液化

10、壞死，以及固有層T淋巴細(xì)胞的帶狀浸潤(rùn)。
　　2．口腔扁平苔蘚患者病損區(qū)組織固有層及外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的顯著性改變，表明細(xì)胞免疫功能的紊亂在口腔扁平苔蘚發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。
　　3．口腔黏膜上皮組織中角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡及凋亡抑制因子Bcl-2在病損區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)帶處和凋亡促進(jìn)因子 Bax在上皮基底層角質(zhì)形成細(xì)胞中表達(dá)增強(qiáng)，提示細(xì)胞凋亡異常與口腔扁平苔蘚的發(fā)生、發(fā)展有重要關(guān)系，病損區(qū)組織超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果也與之相符。