迷迭香酸抗支原體源性脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白誘導的巨噬細胞凋亡及機制探討.pdf

1、目的：觀察支原體脂質(zhì)相關(guān)膜蛋白(簡稱脂蛋白，Lipid-associated Membrane Proteins，LAMPs)誘導巨噬細胞發(fā)生凋亡的作用，初步探討其機制；研究迷迭香酸(Rosmarinic acid，RosA)對支原體LAMPs誘導的巨噬細胞凋亡具有保護作用，并初步探討其藥理機制。 方法：以支原體LAMPs損傷巨噬細胞為模型，四甲基偶氮唑鹽（MTT）法求出支原體LAMPs作用于巨噬細胞所致凋亡的濃度和時間（IC5

2、0值），然后用DNA片斷化分析法觀察7.5mg/L LAMPs對巨噬細胞DNA降解的影響；吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)熒光染色觀察細胞形態(tài)的改變；RT-PCR、Western blot分別檢測LAMPs對巨噬細胞p53、Bcl-2和Bax mRNA和蛋白含量表達的影響。一些實驗中還運用了碘化丙啶(Propidium iodide, PI)染色流式細胞術(shù)檢測細胞的凋亡率。 為了檢測支原體LAMPs或RosA對巨噬細胞作用的量效關(guān)

3、系，分別用1.25, 2.5, 5, 7.5, 10 和20 mg/L的LAMPs或25, 50, 100, 200 μmol/L的RosA作用細胞24小時；同時，為了檢測支原體LAMPs或RosA對巨噬細胞作用的時效關(guān)系，采用上述濃度的支原體LAMPs或RosA分別對細胞作用3、6、12、24、36、48小時。 結(jié)果：用不同劑量支原體LAMPs (1.25、2.5、5、7.5、10、20mg/L)孵育細胞24小時后，細胞存活率

4、隨藥物濃度的增加依次下降；7.5 mg/L支原體LAMPs孵育細胞24小時后，DNA呈典型的凋亡“梯帶”，p53表達呈濃度依賴性上調(diào)，加入p53阻斷劑Pifithrin-α（30 μmol/L）后，細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，凋亡細胞減少，同時Bcl-2表達上調(diào)，Bax表達下調(diào)。 MTT結(jié)果顯示100 μmol/L RosA具有最好的保護效果，用100 μmol/L RosA預(yù)處理細胞1小時后，再用7.5 mg/L支原體LAMPs孵育