支原體巨噬細(xì)胞活化脂肽-2經(jīng)MAPKs途徑誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)MMP-9.pdf

1、支原體感染機(jī)體后主要通過(guò)單核、巨噬細(xì)胞清除病原體。其中單核細(xì)胞以阿米巴樣運(yùn)動(dòng)穿過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞，隨后突破血管基底層和結(jié)締組織到達(dá)感染部位是發(fā)揮免疫應(yīng)答的重要步驟。在此過(guò)程中，基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）能通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)，從而參與炎癥反應(yīng)以及血管生成等多種生物學(xué)效應(yīng)，因而發(fā)揮著關(guān)鍵作用。臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，支原體感染后，患者血清或大鼠羊水中MMP-9含量顯著增高，這表明MMP-9也參與了支原體感染后的炎癥反應(yīng)。
　　為了進(jìn)一步了

2、解支原體感染對(duì)MMP-9分泌的影響，本研究從以下幾方面進(jìn)行體外研究：
　?。?）培養(yǎng)人單核細(xì)胞系THP-1細(xì)胞，分別用0.1、1.0和5.0κg/mL的支原體巨噬細(xì)胞活化脂肽-2（MALP-2）刺激不同時(shí)間，用ELISA和Western blot分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中MMP-9的含量以及金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TIMP-1）的表達(dá)；實(shí)時(shí)定量PCR觀察MMP-9以及TIMP-1 mRNA的表達(dá)水平；比色法分析MMP-9活性的變化

3、。
　?。?）THP-1細(xì)胞預(yù)先與絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制劑孵育30min，隨后用5κg/mL MALP-2刺激18h， ELISA觀察其對(duì)MMP-9分泌的影響。結(jié)果顯示：THP-1細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)下MMP-9和TIMP-1表達(dá)水平較低。當(dāng)分別給予0.1、1.0和5.0κg/mL MALP-2作用18h后，可誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分泌MMP-9和表達(dá)TIMP-1，且隨著MALP-2濃度的增加，MMP-9的產(chǎn)生以及TIMP-1表達(dá)

4、水平相應(yīng)增加，但TIMP-1的增幅低于MMP-9；實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果表明：不同濃度的MALP-2處理THP-1細(xì)胞16h后，也可上調(diào)細(xì)胞內(nèi)MMP-9和TIMP-1 mRNA的表達(dá)水平，但MMP-9 mRNA增高更顯著。同時(shí)MALP-2處理也可增加細(xì)胞培養(yǎng)上清中MMP-9的酶活性。此外， MALP-2作用THP-1細(xì)胞6h后即可上調(diào)MMP-9 mRNA表達(dá)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，mRNA表達(dá)水平逐漸增高，16h后達(dá)到峰值，并持續(xù)高表達(dá)至36h