復(fù)方顛倒散藥物面膜的皮膚毒理學及臨床應(yīng)用研究.pdf

1、目的： 1.探討復(fù)方顛倒散藥物面膜的制備工藝。 2.對復(fù)方顛倒散藥物面膜的質(zhì)量進行考察。 3.考察復(fù)方顛倒散藥物面膜經(jīng)皮膚用藥的安全性。 4.考察復(fù)方顛倒散藥物面膜的臨床療效及人體外用的安全性。 方法： 1.根據(jù)單因素考察和正交實驗設(shè)計優(yōu)化處方，以單硬脂酸甘油酯、16/18醇、液體石蠟等作為油相，以乙二胺四乙酸二鈉鹽和純化水作為水相，以硬脂醇醚-2和硬脂基醚-21作為非離子表面活性劑，以甘

2、油和丙二醇作為保濕劑，以漢生膠作為懸浮劑，以二氧化鈦作為遮光劑。采用乳膏劑的制備方法制備復(fù)方顛倒散藥物面膜。 2.采用自身涂布、肉眼觀察及顯微鏡下觀察的方法評價面膜的外觀及細膩度；分別采用恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、離心機及室溫貯存的方法考察面膜的穩(wěn)定性；用PH計測定復(fù)方顛倒散藥物面膜的PH值。 3.選擇Fmmu豚鼠150只，新西蘭大耳白兔8只。①取豚鼠70只，按隨機數(shù)字表法分成7組，即完整皮膚高劑量組、完整皮膚中劑量組、完整皮膚

3、低劑量組和破損皮膚高劑量組、破損皮膚中劑量組、破損皮膚低劑量組以及正常對照組，每組10只，進行急性皮膚毒性試驗。給藥方法：給藥前將豚鼠對稱性脫毛，脫毛面積大約為4cm×5cm。破損皮膚組采用手術(shù)刀片在脫毛皮膚區(qū)域作＃字劃痕，以滲血為度。分別取2.5g(高劑量)、2g(中劑量)、1.5g(低劑量)均勻涂抹于脫毛區(qū)。再以玻璃紙和雙層紗布封包受試區(qū)。24小時后清洗受試物。連續(xù)觀察14d，每日觀察大鼠體重、進食量、呼吸、體態(tài)、眼、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、

4、四肢活動、糞便性狀及死亡情況。②取豚鼠40只，按隨機數(shù)字表法分成4組，即高、中、低劑量組和正常對照組。每組10只，進行長期皮膚毒性試驗。試驗方法：給藥前將豚鼠背部兩側(cè)脫毛，脫毛面積為4cm×5cm。分別取2.5g(高劑量)、2g(中劑量)、1.5g(低劑量)均勻涂抹于脫毛區(qū)。再以雙層紗布和玻璃紙覆蓋，再以無刺激性膠布封閉、固定，4小時后清洗受試物。每日給藥1次，連續(xù)給藥60天。每日觀察豚鼠體重、進食量、呼吸、體態(tài)、眼、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢

5、活動、糞便性狀及死亡情況。末次給藥后24小時用10％的水合氯醛麻醉豚鼠(8ml/kg)，然后取腹主動脈血3～4mL進行血液學、血液生化學檢查，并對受試區(qū)皮膚組織及各臟器進行病理學檢查。檢查臟器包括：肝、腎、肺、心臟、脾、胃、胰腺、甲狀腺、腦及生殖器官。③取家兔8只，按隨機數(shù)字表法分成完整皮膚組和破損皮膚組，每組4只。采用同體自身左右對比法進行皮膚刺激性試驗。試驗方法：給藥前24小時將家兔脊柱兩側(cè)去毛，去毛區(qū)范圍每側(cè)為7cm×7cm，去毛

6、后24小時檢查去毛皮膚是否因去毛而受傷。破損皮膚的制作：采用手術(shù)刀將去毛消毒皮膚劃破，以滲血為度，左右兩側(cè)皮膚的破損程度應(yīng)基本一致，在左側(cè)去毛區(qū)涂受試藥物2g，右側(cè)涂賦形劑作為空白對照組。涂藥24小時后，用溫水去除殘留受試物。此后1，24，48，72小時觀察皮膚反應(yīng)。④取豚鼠30只，按隨機數(shù)字表法分成3組，其中第1組為復(fù)方顛倒散藥物面膜組(復(fù)方顛倒散藥物面膜0.2g/只)，第2組為陽性對照組(0.1％2，4-二硝基氯代苯0.2ml/只)

7、，第3組為空白對照組(賦形劑0.2g/只)。每組10只，進行皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗。試驗方法：在致敏接觸階段，取復(fù)方顛倒散面膜0.2g涂于豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)，用兩層紗布和一層玻璃紙覆蓋，再以無刺激膠布封閉、固定，6小時后去除敷料和清洗受試物。第7天和第14天以同樣方法各重復(fù)1次?？瞻讓φ战M與陽性對照組的方法同上；在激發(fā)接觸階段，于末次給受試物后致變態(tài)反應(yīng)后14天，將受試物0.2g涂于豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)，其中陽性對照組給予0.1％2，4-二硝基氯代苯，

8、6小時后去掉受試物，即刻觀察皮膚變態(tài)反應(yīng)情況，之后于24，48，72小時再次觀察皮膚反應(yīng)。 4.將81例患者隨機分成試驗組(41例)和對照組(40例)，其中試驗組給予復(fù)方顛倒散藥物面膜，對照組給予維胺酯維生素E乳膏，1小時后洗去，每日1次，連續(xù)治療4周后判斷療效。 5.統(tǒng)計分析：以SPSS13.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以X±S表示，兩組組間顯著性檢驗用獨立樣本T檢驗；多組組間顯著性檢驗用One-wayA

9、nnova分析；前后兩個不同時間點的比較采用重復(fù)測量方差分析，當P<0.05時，差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： 1.制備的復(fù)方顛倒散藥物面膜為淡黃褐色、質(zhì)地均勻、外觀細膩及富有光澤感的一種O/W(水包油型)的劑型。 2.制備的復(fù)方顛倒散藥物面膜，經(jīng)耐熱、耐寒、室溫貯存及離心試驗，均無出現(xiàn)油相與水相分離現(xiàn)象，無變粗，無色澤改變，無沉淀及藥物析出；PH計測定面膜膏體的PH值為5.35±0.12。 3.實驗豚鼠15

10、0只，兔子8只，均進入結(jié)果分析。復(fù)方顛倒散藥物面膜的皮膚毒理學研究顯示：在有效觀察時間范圍內(nèi)①單次給予受試物后，2周內(nèi)各組豚鼠無1例死亡。高、中、低劑量組與對照組相比以及完整皮膚與破損皮膚相比，皮膚、粘膜、飲食均無變化，各系統(tǒng)亦無異常變化。②連續(xù)給予受試物60天后，各組豚鼠均未見死亡。與對照組相比，高劑量組、中劑量組和低劑量組豚鼠的體重、精神、飲食情況以及皮膚粘膜均未發(fā)現(xiàn)異常表現(xiàn)，各系統(tǒng)及四肢活動亦無異常。末次給藥后24小時血液學、血液

11、生化學檢查結(jié)果各組間均無顯著性差異(P>0.05)。各臟器病理學檢查結(jié)果：臟器表面光滑，組織結(jié)構(gòu)排列有序，細胞大小正常，胞漿、胞核著色均無異常。皮膚組織學檢查結(jié)果：表皮、真皮及皮下組織結(jié)構(gòu)完整，無變性、壞死，也無中性粒細胞浸潤和血管內(nèi)皮細胞損傷。③復(fù)方顛倒散2g外用時，與對照區(qū)相比，家兔無論完整皮膚區(qū)還是破損皮膚區(qū)差異均無顯著性，既無紅斑形成，也無水腫出現(xiàn)。試驗結(jié)果表明，復(fù)方顛倒散藥物面膜對家兔的完整皮膚及破損皮膚均無刺激性。④按皮膚過

12、敏反應(yīng)評分標準和致敏率分類來判斷，復(fù)方顛倒散藥物面膜組與空白對照組的豚鼠脫毛區(qū)皮膚6～72小時未見明顯紅斑、水腫等癥狀，也未見哮喘、休克等嚴重的全身過敏反應(yīng)。陽性對照組給藥后皮膚均有不同程度的紅斑、水腫形成，按照評分標準為2.9分，致變態(tài)反應(yīng)率為100％，24，48，72小時后皮膚仍有紅斑、水腫出現(xiàn)。試驗結(jié)果說明，復(fù)方顛倒散面膜及其基質(zhì)對皮膚均無致敏性。 4.該面膜對粉刺、丘疹、膿皰的皮損改善效果優(yōu)于對照組(維胺酯維生素E組)，

13、對痤瘡患者的總有效率為86.5％，并且不良反應(yīng)較少，其療效也優(yōu)于對照組，因此該面膜對痤瘡患者具有良好的效果，尤其適合于輕中度痤瘡患者的治療。并且不良反應(yīng)較少。 結(jié)論： 1.復(fù)方顛倒散藥物面膜制備工藝簡單，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。 2.本項實驗研究表明，在有效觀察時間和一定劑量范圍內(nèi)，復(fù)方顛倒散藥物面膜對實驗動物均無嚴重系統(tǒng)吸收毒性，無皮膚致敏性，具有質(zhì)地均勻、外觀細膩、易于涂布、藥物透皮吸收好等優(yōu)點。 3.復(fù)方顛倒