硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液治療大鼠脊神經(jīng)根炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文從以下兩方面對硬膜外注射脈絡(luò)寧混合液的療效、作用和機(jī)理進(jìn)行研究。 1、硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液對脊神經(jīng)根炎治療作用的實(shí)驗(yàn)研究 1、1目的應(yīng)用Nissl染色、Weil's染色和免疫組織化學(xué)的方法，從病理組織學(xué)變化方面檢驗(yàn)硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液治療實(shí)驗(yàn)性大鼠脊神經(jīng)根炎癥的療效，并且觀察硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液在調(diào)節(jié)脊神經(jīng)根炎癥誘發(fā)的相鄰脊髓內(nèi)神經(jīng)膠質(zhì)反應(yīng)性增生和促進(jìn)損傷神經(jīng)纖維再生方面的作用。 1、2材料和方法30只

2、Wistar雄性成年大白鼠，體重220-260g。其中18只在無菌手術(shù)下復(fù)制腰神經(jīng)根炎的動物模型，術(shù)后隨機(jī)分為3組，即模型組(S)6只，脈絡(luò)寧復(fù)合液治療組(A)6只，激素康寧克通治療組(H)6只。另取6只只做手術(shù)，不放濾紙片，即假手術(shù)組(K)。術(shù)后A組、H組每只均從硬膜外給藥6ml/kg，每四天給一次藥，一共給藥四次，K組給于等量生理鹽水，另6只為正常對照組(Z)，同期喂養(yǎng)不作任何處理。在造模后18天取材，用1﹪戊巴比妥鈉(40mg/k

3、g)腹腔麻醉，4﹪多聚甲醛溶液(0.01MPBS液配制，PH值7.2-7.4)經(jīng)心臟主動脈插管灌注處死動物。取出L2-L3段炎癥損傷的神經(jīng)根以及相應(yīng)的脊髓，用4﹪多聚甲醛繼續(xù)固定待檢。制備石蠟切片，進(jìn)行Nissl、髓鞘(Weil's氏法)和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)、神經(jīng)生長相關(guān)蛋白-43(Growth-associatedprotein，GAP-43)、神經(jīng)絲(Neurofi

4、lament，NF)免疫組化染色。光鏡觀察炎癥神經(jīng)根和相鄰部位脊髓的病理組織結(jié)構(gòu)的變化，并利用3-Y圖像分析儀分析Nissl和Weil's染色切片內(nèi)正常神經(jīng)元及神經(jīng)纖維的平均光密度值(OD值)，及GFAP、NF、GAP-43陽性表達(dá)物的平均光密度(Opticaldensitymean，OD)。 1、3結(jié)果和結(jié)論 1、3、1脊神經(jīng)根炎癥的病理變化和硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液療效的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果(1)Nissl染色顯示，S組正常神

5、經(jīng)元的OD值明顯降低；K組和Z組正常神經(jīng)元的OD值相近；經(jīng)過治療后，H組和A組變性神經(jīng)元的OD值明顯減少，正常神經(jīng)元的OD值明顯增加。(2)髓鞘染色切片顯示，S組脊髓灰質(zhì)內(nèi)正常神經(jīng)纖維的OD值與其它各組相比，有顯著差異性(P＜0.05)，A組和H組經(jīng)過治療后神經(jīng)纖維的OD值明顯升高，與Z組、K組相比，無顯著差異性(P＞0.05)。 結(jié)論(1)從硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液治療脊神經(jīng)根炎確有療效。(2)脈絡(luò)寧復(fù)合液具有神經(jīng)元保護(hù)作用，能

6、促進(jìn)變性神經(jīng)元可逆性恢復(fù)，并保護(hù)正常神經(jīng)元不受炎癥侵害。(3)脈絡(luò)寧復(fù)合液可以減輕炎癥損傷導(dǎo)致的脫髓鞘反應(yīng)。 1、3、2硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液抑制脊神經(jīng)根炎大鼠脊髓內(nèi)神經(jīng)膠質(zhì)反應(yīng)性增生的實(shí)驗(yàn)研究 結(jié)果(1)術(shù)后，S組神經(jīng)根炎癥灶鄰近的脊髓內(nèi)神經(jīng)膠質(zhì)明顯的增生，逐漸形成大而致密的膠質(zhì)瘢痕，并累及對側(cè)的脊髓灰質(zhì)；Z組和K組脊髓內(nèi)幾乎沒有神經(jīng)膠質(zhì)的增生；A組和H組神經(jīng)膠質(zhì)的反應(yīng)比較輕，形成的瘢痕很小，而對側(cè)脊髓幾乎沒有致密的瘢

7、痕。(2)S組GFAP陽性表達(dá)物的光密度明顯上調(diào)，與其他各組相比，具有顯著差異性(P＜0.01)。(3)Z組和K組GFAP陽性表達(dá)物的光密度值最低，兩組比較，沒有差異性(P＞0.05)。(4)A組和H組GFAP陽性表達(dá)物的光密度值相比，沒有顯著差異性(P＞0.05)，與Z組、K組相比，也無顯著差異性(P＞0.05)，但兩組GFAP陽性表達(dá)物的光密度值都明顯低于S組(P＜0.01)。 結(jié)論(1)脊神經(jīng)根的炎癥損傷可以誘發(fā)鄰近脊髓內(nèi)

8、星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生和神經(jīng)膠質(zhì)結(jié)締組織瘢痕形成。(2)脈絡(luò)寧復(fù)合液能抑制脊神經(jīng)根炎癥誘發(fā)的鄰近脊髓內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生和膠質(zhì)瘢痕的形成，這為神經(jīng)纖維的修復(fù)和再生提供了有力的微環(huán)境。 1、3、3硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液促進(jìn)脊髓內(nèi)神經(jīng)纖維再生的實(shí)驗(yàn)研究 結(jié)果：神經(jīng)元GAP-43表達(dá)樣本的觀察結(jié)果：①S組在炎癥損傷的脊神經(jīng)根及其炎癥灶鄰近的脊髓內(nèi)可見大量的GAP-43陽性表達(dá)的神經(jīng)纖維，GAP-43陽性表達(dá)物的光密度值顯著

9、升高，與其他各組比較，組間差異顯著(P＜0.01)；②與S組相比，A組和H組樣本炎癥損傷的脊神經(jīng)根及其炎癥灶鄰近的脊髓內(nèi)，可以看到GAP-43陽性表達(dá)物的數(shù)量和強(qiáng)度都略有下調(diào)，兩組之間相比，無顯著差異性(P＞0.05)；但兩組與Z組、K組相比，也仍有一定的差異性(P＜0.05)。半定量圖像分析結(jié)果表明，A組樣本炎癥損傷的脊神經(jīng)根及其炎癥灶鄰近的脊髓內(nèi)GAP-43陽性表達(dá)物的光密度明顯低于S組(P＜0.01)，但較Z組高(P＜0.05)。

10、 結(jié)論(1)脊神經(jīng)根發(fā)生炎癥損傷后，炎癥損傷的脊神經(jīng)根及其炎癥灶鄰近的脊髓內(nèi)有明顯的神經(jīng)纖維再生。(2)用脈絡(luò)寧復(fù)合液通過硬膜外注藥治療后，可以促進(jìn)損傷神經(jīng)纖維的再生和修復(fù)，減少神經(jīng)纖維再生和修復(fù)的時(shí)間。 2、硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液治療脊神經(jīng)根炎作用機(jī)理的探討 2、1目的觀察硬膜外注入脈絡(luò)寧復(fù)合液對實(shí)驗(yàn)性脊神經(jīng)根炎大鼠血清或血漿中炎癥介質(zhì)的影響及對脊神經(jīng)根炎癥鄰近脊髓內(nèi)凋亡相關(guān)基因的調(diào)節(jié)作用，初步探討該復(fù)合液的作

11、用機(jī)理。 2、2材料和方法 2、2、1血液中炎癥介質(zhì)的檢測：30只Wistar雄性成年大白鼠，體重220-260g。其中18只在無菌手術(shù)下復(fù)制腰神經(jīng)根炎的動物模型，術(shù)后隨機(jī)分為3組，即模型組(S)6只，脈絡(luò)寧復(fù)合液治療組(A)6只，激素康寧克通治療組(H)6只。另取6只只做手術(shù)，不放濾紙片，即假手術(shù)組(K)。術(shù)后A組、H組每只均從硬膜外給藥6ml/kg，每四天給一次藥，一共給藥四次，K組給于等量生理鹽水，另6只為正常對照

12、組(Z)，同期喂養(yǎng)不作任何處理。在造模18天后取材，1﹪戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔麻醉，剪開胸腔暴露心臟，從右心室取血8ml，迅速放入盛有不同抗凝劑的相應(yīng)試管中，離心，取血清或血漿，4℃冰箱保存，樣本送放射免疫中心進(jìn)行白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、血栓素(TXB2)、腎素活性(PRA)、血管緊張素(AT-Ⅱ)放免測定。 2、2、2凋亡相關(guān)基因bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的檢測：檢測材料取自脊神經(jīng)根炎

13、大鼠炎癥側(cè)相鄰的脊髓，按免疫組化法常規(guī)制備石蠟切片，用SP法進(jìn)行免疫組化樣本的制備，用美國3-Y圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行檢測目標(biāo)陽性細(xì)胞OD值，對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析。 2、3結(jié)果和結(jié)論 2、3、1實(shí)驗(yàn)性脊神經(jīng)根炎大鼠血清或血漿中炎癥介質(zhì)的改變及脈絡(luò)寧復(fù)合液作用機(jī)理的探討結(jié)果(1)S組血漿或血清中TXB2、PRA、AT-Ⅱ、IL-6、IL-8的含量明顯升高，與其它各組相比差異非常顯著(P＜0.01)；(2)K組血漿或血清中TX

14、B2、PRA、AT-Ⅱ、IL-6、IL-8的含量與正常組相比，無顯著差異(P＞0.05)；(3)A組、H組各炎癥介質(zhì)的含量明顯降低，與Z組相比，無顯著差異性(P＞0.05)。 結(jié)論(1)脊神經(jīng)根炎癥損傷可以導(dǎo)致血液中炎癥介質(zhì)出現(xiàn)明顯的異常。(2)脈絡(luò)寧復(fù)合液可以降低血漿或血清中炎癥介質(zhì)的含量。(3)結(jié)果提示脈絡(luò)寧復(fù)合液可以通過改善微循環(huán)，實(shí)現(xiàn)對炎癥損傷神經(jīng)組織的保護(hù)作用。 2、3、2硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液對脊髓內(nèi)凋亡相關(guān)

15、基因調(diào)節(jié)作用的探討結(jié)果(1)S組Bax陽性細(xì)胞的平均光密度值(OD)明顯上調(diào)，與其他各組相比具有顯著差異性(P＜0.01)；A組和H組Bax陽性細(xì)胞光密度均下調(diào)，與正常組相比，差異不顯著(P＞0.05)，而且兩組組間相比，也無顯著差異性(P＞0.05)。(2)S組bcl-2陽性表達(dá)的神經(jīng)元略有上調(diào)，但與Z組、K組比較，沒有顯著差異性(P＞0.05)；經(jīng)過治療的兩個(gè)組bcl-2陽性表達(dá)物OD值均明顯上調(diào)，與S組比較，差異顯著(P＜0.05

16、)，但與Z組、K組比較，沒有顯著差異性(P＞0.05)。(3)Bax/bcl-2比值的比較：當(dāng)脊髓受到炎癥損傷后，由于Bax的表達(dá)顯著上調(diào)，使Bax/bcl-2比值倒置；經(jīng)過治療后，Bax/bcl-2的比值趨于平穩(wěn)，與Z組比較無顯著差異性(P＞0.05)。 結(jié)論：脈絡(luò)寧復(fù)合液可以通過對于細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的調(diào)節(jié)，提高脊髓炎癥損傷區(qū)神經(jīng)元的生存能力，促使某些神經(jīng)元逃逸損傷誘發(fā)的凋亡程序而進(jìn)入修復(fù)，這可能是脈絡(luò)寧復(fù)合液神經(jīng)元保護(hù)作用的

17、機(jī)理之一。 總結(jié)論1、硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液具有神經(jīng)元保護(hù)作用，能促進(jìn)變性神經(jīng)元可逆性恢復(fù)，并保護(hù)正常神經(jīng)元不受炎癥侵害。 2、硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液可以減輕炎癥損傷導(dǎo)致的脫髓鞘反應(yīng)。 3、硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液能夠減輕脊神經(jīng)根炎癥誘發(fā)的鄰近脊髓內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生和膠質(zhì)瘢痕的形成，這可能提供了神經(jīng)纖維的修復(fù)和再生的微環(huán)境。 4、硬膜外注射脈絡(luò)寧復(fù)合液可以促進(jìn)損傷神經(jīng)纖維的再生和修復(fù)。 5、硬