胞外組蛋白對肝組織的損傷效應(yīng)與肝衰竭發(fā)病機制相關(guān)性的研究.pdf

1、目的:探討肝衰竭(LF)時胞外組蛋白對肝組織細胞的損傷效應(yīng)及其機制。
　　方法:通過HE染色及免疫組化觀察肝衰竭肝組織中肝臟細胞(主要是肝細胞與內(nèi)皮細胞)的損傷及炎癥細胞浸潤情況;收集LF患者血清,測定組蛋白H3與H4、PTA、TBil、Cr、國際標準化比值(international normalized ratio,INR),計算患者終末期肝病模型(model for end-stage liver disease,MELD)

2、評分;比較患者與健康者血清中組蛋白水平,統(tǒng)計分析其與PTA、MELD評分的相關(guān)性;用患者血清、培養(yǎng)的L-02人肝細胞裂解上清液、上清液+抗組蛋白H3與H4抗體分別處理培養(yǎng)的L-02細胞、HUVEC細胞,觀察細胞形態(tài)與凋亡率;用純化組蛋白處理培養(yǎng)的L-02細胞,觀察胞內(nèi)鈣離子濃度及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性;用APC預處理的純化組蛋白處理L-02細胞、HUVEC細胞,觀察組蛋白的細胞損傷效應(yīng)。
　　結(jié)果:肝衰竭

3、肝組織中見肝細胞、內(nèi)皮細胞大量破壞,炎癥細胞廣泛浸潤;與健康者[H3:(42.67±12.80)μg/mL/ H4:(40.34±14.56)μg/mL]比較,患者胞外組蛋白濃度[H3:(5390.29±1032.03)μg/mL/H4:(4205.09±662.34)μg/mL]顯著升高(t=32.76/t=39.74,均P<0.01),且患者胞外組蛋白H3/H4水平與PTA均呈負相關(guān)(r=-0.325,P=0.038/r=-0.57

4、2,P=0.028)、與MELD評分均呈正相關(guān)(r=0.359,P=0.021/r=0.568,P=0.007);患者血清、L-02細胞裂解上清液對培養(yǎng)的L-02細胞、HUVEC細胞均有損傷效應(yīng),該效應(yīng)受抗組蛋白抗體抑制[(9.3±1.5)％比(14.3±0.6)%,t=4.259,P=0.02];經(jīng)組蛋白處理,培養(yǎng)的L-02細胞胞內(nèi)鈣離子濃度([Ca2+]i)上升、Caspase-3活性隨組蛋白處理濃度增加而增強,抗組蛋白抗體對Cas